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大鼠組胺（Histamine）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書
大鼠組胺（Histamine）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
本試劑盒用于體外定量檢測大鼠血清,、血漿,、組織,、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中組胺（Histamine）的含量。
使用目的
本試劑盒用于體外定量檢測大鼠血清,、血漿,、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中組胺（Histamine）的含量,。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠組胺（Histamine）水平,。用純化的大鼠組胺（Histamine）抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入組胺（Histamine）,，再與HRP標(biāo)記的組胺（Histamine）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的組胺（Histamine）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠組胺（Histamine）濃度,。
注意事項
1. 本試劑盒僅用于科研,，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。
2. 使用試劑盒前,，請仔細(xì)閱讀說明書,，以試劑盒內(nèi)的說明書為準(zhǔn),，請務(wù)必理解說明書內(nèi)容。
3. 酶標(biāo)包被板屬于可拆型,，開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入鋁箔袋密封并2-8°C保存。
4. 加樣樣本和試劑應(yīng)盡快完成,。
5. 為了讓測試結(jié)果更準(zhǔn)確,，盡可能混勻酶標(biāo)板孔中所加試劑，酶標(biāo)板不能反復(fù)使用,。
6. 避免實驗過程中酶標(biāo)板干燥,；清洗后盡快加試劑。
7. 實驗開始,，所有試劑應(yīng)平衡到室溫 （21-26°C） 后方可進(jìn)行,。溫度會影響吸光度值，但不影響樣本值,。
8. 切忌用口加樣,，以免試劑和樣本粘到皮膚和粘膜上。
9. 不要在處理樣本或試劑的區(qū)域抽煙,、吃東西,、喝酒或化妝。
10. 操作時帶一次性手套,，微生物的污染會影響實驗結(jié)果的正確性,。
11. 操作應(yīng)按照國家規(guī)定的安全條列進(jìn)行。
12. 過期的試劑盒切勿再使用,。
13. TMB 底物對皮膚有刺激性,，不慎入眼，立即用大量水沖洗,，皮膚上不慎接觸到也應(yīng)立即用肥皂,，并用大量的水沖洗。試驗中被污染的物品在下次使用前應(yīng)盡快清洗,。
14. 配置的化學(xué)品或使用后的試劑,，根據(jù)國家微生物安全條列都視為危險廢物。
試劑盒組成
| 說明書 | 1 | |
| | 2 | |
| 酶標(biāo)包被板 | 12孔×8條 | 2-8℃ |
| 標(biāo)準(zhǔn) | 0.5ml×1 瓶 0 ng/ml 0.5ml×1瓶 0.3 ng/ml 0.5ml×1瓶 0.6 ng/ml 0.5ml×1瓶 1.2 ng/ml 0.5ml×1瓶 2.4 ng/ml 0.5ml×1瓶 4.8 ng/ml | 2-8℃ |
| 生物素標(biāo)記的抗Histamine抗體 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 顯色劑B液 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 終止液 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 酶標(biāo)試劑 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 2-8℃ |
需要而未提供的試劑和器材
1. 吸光度值在450nm波長下檢測的酶標(biāo)儀,。
2. 1-2ml的加樣器,。
3. 100 ml和1L的量筒,。
4. 吸水紙,。
5. 37°C恒溫箱。
6. 蒸餾水或去離子水,。
7. 數(shù)據(jù)分析和繪圖軟件,，圖紙,。
8. 標(biāo)準(zhǔn)和樣品稀釋的試管。
儲存條件
1. 有效期內(nèi)的試劑如開封后未用完,，請2-8°C 保存,。
2. 過期的試劑請不要用，打開后的試劑2-8°C 保存,。
3. 酶標(biāo)包被板必須2-8°C 保存,，如有未用完的酶標(biāo)包被板，打開的鋁箔袋須密封并2-8°C 保存,。
4. 開封后的試劑盒2-8°C只能保存8周,。
試劑準(zhǔn)備
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。
樣本處理及要求
血清-用采血管收集血液,，室溫血液自然凝固30分鐘,，1000 xg離心15分鐘左右，收集上清,，盡早進(jìn)行實驗,，或者分裝后-20°C或 -80°C 保存。
血漿-收集好的血漿根據(jù)要求選擇EDTA或者肝素作為抗凝劑,，2-8°C 1000 xg離心15分鐘左右,，30分鐘內(nèi)收集好，-20°C或 -80°C 保存,，避免反復(fù)凍融,。
細(xì)胞上清及相關(guān)液體-收集好的樣本離心后應(yīng)盡快實驗，或者分裝后-20°C或 -80°C 保存,，避免反復(fù)凍融,。
注意事項
1. 所有試劑和樣本使用前必須在室溫下平衡，混勻試劑時不應(yīng)起泡沫,。
2. 一旦實驗開始,，各操作步驟都應(yīng)盡快完成。
3. 避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管,，以免交叉污染,。
4. 一般情況，酶的反應(yīng)與時間和溫度成正比,。
操作步驟
1. 加標(biāo)準(zhǔn)品：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔,，依次加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50ul（建議每個濃度做2個平行孔）。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品,、生物素標(biāo)記的抗Histamine抗體及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品40μl,，然后再加生物素標(biāo)記的抗Histamine抗體10μl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用,。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次,，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同3,。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行
實驗結(jié)果計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度,，即為樣品的實際濃度。
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