日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學(xué)|元素分析|水分測(cè)定儀|樣品前處理|試驗(yàn)機(jī)|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>其他文章>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

人黑色素細(xì)胞抗體酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

來(lái)源:上海銳聰實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司   2012年02月23日 12:44  

本試劑盒僅供研究使用
預(yù)期應(yīng)用
ELISA法定量測(cè)定人血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它相關(guān)液體中黑色素細(xì)胞抗體含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心酶標(biāo)免疫分析法測(cè)定標(biāo)本中黑色素細(xì)胞抗體水平,。用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入黑色素細(xì)胞抗體抗原,、生物素化的抗人黑色素細(xì)胞抗體的抗體、HRP標(biāo)記的親和素,,經(jīng)過(guò)*洗滌后用底物TMB顯色,。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的黑色素細(xì)胞抗體呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),,計(jì)算樣品濃度。
試劑盒組成及試劑配制
酶聯(lián)板:一塊(96孔)
標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品):2瓶,,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,,其濃度為100 ng/mL,,做系列倍比稀釋后,分別稀釋成100 ng/mL,,50 ng/mL ,,25 ng/mL,12.5 ng/mL,,6.25 ng/mL,,3.12 ng/mL,1.56 ng/mL,,其原液直接作為zui高標(biāo)準(zhǔn)濃度,,樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 ng/mL,臨用前15分鐘內(nèi)配制,。
如配制50ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5ml 100ng/mL的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推,。
樣品稀釋液:1×20ml/瓶,。
檢測(cè)稀釋液A:1×10ml/瓶。
檢測(cè)稀釋液B:1×10ml/瓶,。
檢測(cè)溶液A:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測(cè)稀釋液A 1:100稀釋,,稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制(每孔100ul),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml,。如1ul檢測(cè)溶液A加99ul檢測(cè)稀釋液A的比例配制,,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制,。
檢測(cè)溶液B:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測(cè)稀釋液B1:100稀釋,。稀釋方法同檢測(cè)溶液A。
底物溶液:1×10ml/瓶,。
濃洗滌液:1×30ml/瓶,,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
終止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4),。
標(biāo)本的采集及保存
1.細(xì)胞培養(yǎng)物上清:請(qǐng)離心后收集上清,,并將標(biāo)本保存于-20℃,且應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.血清:標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000 x g離心20分鐘,,取上清即可檢測(cè),,或?qū)?biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
3.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
注:標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè),。
操作步驟
各試劑在使用前平衡至室溫,。
加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔,。除空白孔外,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測(cè)樣品100ul,,注意不要有氣泡,,輕輕混勻,酶標(biāo)板加上蓋,,37℃反應(yīng)120分鐘,。
棄去液體,甩干,,不用洗滌,。
每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100ul,37℃,60分鐘,。洗板3次,,350ul/每孔,甩干,。
每孔加檢測(cè)溶液B工作液 100ul,,37℃,60分鐘,,洗板5次,,甩干。
依序每孔加底物溶液90ul,,37℃避光顯色30分鐘(此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯),。
依序每孔加終止溶液50ul,,終止反應(yīng)(此時(shí)蘭色立轉(zhuǎn)黃色)。用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。
注:
1. 每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔,,該孔不加任何試劑,,只是zui后加底物溶液及2NH2SO4。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零,。
2.為防止樣品蒸發(fā),,試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)。
洗板方法
手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,;在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內(nèi),,浸泡1-2分鐘,,根據(jù)需要,重復(fù)此過(guò)程數(shù)次,。
自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機(jī),,應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。
特異性
    本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人黑色素細(xì)胞抗體,,且與其它相關(guān)蛋白無(wú)交叉反應(yīng),。
計(jì)算
  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo)),OD值為縱坐標(biāo)(普通坐標(biāo)),,在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù),;或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,,再乘以稀釋倍數(shù),,即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項(xiàng)
洗滌過(guò)程非常重要,,不充分的洗滌易造成假陽(yáng)性,。
一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,,推薦使用排槍加樣,。
請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔,。
如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高,,請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù),。
5.在配制標(biāo)準(zhǔn)品,、檢測(cè)溶液工作液時(shí),,請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆,。
6.底物請(qǐng)避光保存,。
檢測(cè)范圍:
1.56 ng/mL -100 ng/mL
說(shuō)明
1.試劑盒保存:-20℃(較長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí));2-8℃(頻繁使用時(shí)),。
2.有效期:6個(gè)月
3.濃洗滌液會(huì)有鹽析出,,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。
4.剛開(kāi)啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì),,此為正?,F(xiàn)象,不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響,。
5.中,、英文說(shuō)明書(shū)可能會(huì)有不一致之處,請(qǐng)以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn),。
 

免責(zé)聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載,、摘編或利用其它方式使用上述作品,。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,,并注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”,。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任,。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源(非化工儀器網(wǎng))的作品,,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),,不承擔(dān)此類(lèi)作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任,。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源,,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
  • 如涉及作品內(nèi)容,、版權(quán)等問(wèn)題,,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利,。
企業(yè)未開(kāi)通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618