合成著色劑是指人工化學合成方法所制成的有機色素,，因其色彩鮮艷,、著色力強、穩(wěn)定性好,、生產(chǎn)成本低等特點廣泛應用于食品工業(yè),。我國對食品中添加合成著色劑有著嚴格的限制，《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》（GB 2760—2024）中允許使用的合成著色劑有11種,，分別為檸檬黃,、日落黃、喹啉黃,、新紅、莧菜紅,、胭脂紅,、you惑紅、赤蘚紅,、酸性紅,、亮藍和靛藍,，并對其允許使用的食品類別和最大使用量做了明確規(guī)定。

　　一,、色譜柱篩選

　　按照食品安全國家標準《食品中合成著色劑的測定 GB 5009.35-2023》項下分析方法,，分別使用4支不同極性C18色譜柱，包括中等級性CAPCELL PAK C18 MGII,、中等級性CAPCELL PAK C18 KG,、高極性CAPCELL PAK C18 AQ,、高疏水性SUPERIOREX II ODS色譜柱，以及鍵合金剛烷基團的CAPCELL PAK ADME-HR色譜柱,，分別對用戶提供的11種合成著色劑混合標準品溶液進行分析,。

　　如圖1所示，在415nm檢測波長下,，5支色譜柱分析結(jié)果中只有ADME-HR色譜柱可得到混合標準品中峰1,、峰2的良好分析結(jié)果，但在610 nm波長下,，峰11、峰12未得到基線分離,；

　　從C18 MGII,、ODS II和C18 KG色譜柱的分析結(jié)果中，可以看到混合標準品中峰1和峰2有分離趨勢,，但未達到基線分離,，同時在520 nm,、610 nm波長下各峰間均可達到基線分離,。

圖1  色譜柱篩選-GB原方法

　　【色譜條件】

　　色譜柱：CP C18 MGII S5; 4.6×250

　　              CP C18 AQ S5; 4.6×250

　　              CP C18 KG S5; 4.6×250

　　              CP ADME HR S5; 4.6×250

　　              SUPERIOREXII ODS S5; 4.6×250

　　流動相：A，0.02 mol/L 乙酸銨   B,，甲醇

　　B(%) 10%(0 min) - 40%(12 min) - 50%(19 min) - 55%(22.5 min) - 95%(24 min) - 95%(33 min) - 10%(34 min) - 10%(42 min)

　　流動速：1.0 mL/min

　　柱動溫：30 ℃

　　檢動測：PDA 415 nm,；520 nm；610 nm

　　樣動品：用戶提供

　　進樣量：10 μL

　　二,、梯度微調(diào)

　　為改善混合標準品中峰1、峰2以及峰11,、峰12的分離,，嘗試對流動相梯度進行微調(diào),，分別降低0-12 min、22.5-24 min梯度斜率,，使用CAPCELL PAK C18 MGII,、SUPERIOREX II ODS、CAPCELL PAK C18 KG,、CAPCELL PAK ADME-HR色譜柱，分別對客戶提供11種合成著色劑標準品進行分析,。

　　其中C18 MGII,、ODS II色譜柱可得到混合標準品的良好分析結(jié)果，結(jié)果如圖2,、3、表1、2（415 nm分離度）所示,，各雜質(zhì)間分離度均大于1.5,，滿足基線分離,，但兩支色譜柱分析結(jié)果中峰10、11,、12出峰位置與參考圖譜中位置反轉(zhuǎn),。

　　圖2 C18 MGII色譜柱分析圖-梯度微調(diào)

　　表1 積分表 C18 MGII 梯度微調(diào)

　　圖3 ODSII色譜柱分析圖-梯度微調(diào)

　　表2 積分表 ODS II 梯度微調(diào)

　　【色譜條件】

　　色譜柱：CP C18 MGII S5; 4.6×250

　　              SUPERIOREXII ODS S5; 4.6×250

　　流動相：A,，0.02 mol/L 乙酸銨   B，甲醇

　　B(%) 5%(0 min) - 25%(12 min) - 50%(19 min) - 55%(22.5 min) - 80%(24 min) - 95%(33 min) - 10%(34 min) - 10%(42 min)

　　流動速：1.0 mL/min

　　柱動溫：30 ℃

　　檢動測：PDA 415 nm,；520 nm,；610 nm

　　樣動品：用戶提供

　　進樣量：10 μL

　　結(jié)  論

　　綜上所述，按照食品安全國家標準《食品中合成著色劑的測定 GB 5009.35-2023》項下分析方法,，原方法下未能得到所有峰的分離,，嘗試對流動相梯度進行微調(diào),，使用CAPCELL PAK C18 MGII、SUPERIOREXII ODS色譜柱,，均可得到混合標準品的良好分析結(jié)果,，各雜質(zhì)間分離度均大于1.5，滿足基線分離,。但兩支色譜柱分析結(jié)果中峰10,、11、12出峰位置與參考圖譜中位置反轉(zhuǎn)（用戶未提供對照品單標,，峰指認通過與標準譜圖對照獲得）。

　　《食品中合成著色劑的測定 GB 5009.35-2023》分析方法推薦用柱

　　F92533

　　CP C18 MGII S5; 4.6×250

　　F41504

　　SUPERIOREXII ODS S5; 4.6×250