微載體免疫技術(shù)

為進(jìn)一步提高血清學(xué)反應(yīng)的敏感性,，加速對被檢標(biāo)本結(jié)果的報告時間,，可應(yīng)用免疫微載體作為診斷液進(jìn)行檢測。這種診斷液系將已知抗體吸附在紅細(xì)胞,、炭粉或乳膠等微載體上,，制成所謂的固相抗體，它是一種仍保持抗體特性的固態(tài)診斷血清,，用它進(jìn)行間接凝集反應(yīng)時,，不但可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異結(jié)合，同時也可使吸附抗體的微量載體聚集在一起,，這樣可使肉眼難以觀察到的微量抗原抗體結(jié)合物,，尤其是微量的可溶性抗原-抗體結(jié)合物,，形成肉眼可見的反應(yīng)產(chǎn)物,，因而明顯地提高了血清學(xué)反應(yīng)的敏感性,，反應(yīng)中的微載體起著“放大器”作用。

(一) 間接紅細(xì)胞凝集試驗 即將已知的抗體球蛋白掛在經(jīng)醛化鞣酸化處理的紅細(xì)胞上,，制成所謂的致敏紅細(xì)胞診斷液,，用以實施反向間接血凝試驗，即在反應(yīng)板孔內(nèi),，如診斷液與被檢的相應(yīng)抗原相遇時,，紅細(xì)胞即被凝集，形成鋸齒狀凝塊沉于孔底,，即為陽性反應(yīng),，否則紅細(xì)胞自然下沉，于孔底形成圓點(diǎn)狀沉淀物為陰性反應(yīng),。另外,，亦可用已知抗原致敏紅細(xì)胞制成診斷液檢測相應(yīng)抗體，此即正向間接血凝試驗,。

間接血凝試驗是一項準(zhǔn)確而敏感的血清反應(yīng),，在敏感性方面表現(xiàn)得尤為突出，如可檢出每ml含100萬個鼠疫桿菌,、野兔熱桿菌或類鼻疽桿菌,，每ml含160萬個炭疽芽胞、2 500萬個布魯氏菌,、5000萬個霍亂弧菌,、0.04μg肉毒梭菌毒素等。不足的方面是由于紅細(xì)胞表面是一個復(fù)雜的有機(jī)結(jié)構(gòu),，上面往往有許多抗原,，可以和血清中的其他成分起反應(yīng)，因而一定程度地影響試驗的特異性,。

(二) 間接炭凝集試驗 即將已知的抗體球蛋白在一定溫度和pH值下吸附在細(xì)炭粉表面上,，制成所謂的致敏炭粉診斷液，當(dāng)與相應(yīng)抗原在實施反應(yīng)的玻板上相遇時,，炭粉則被凝集,，此時傾斜玻璃板觀察時，則看到好似無數(shù)個黑色帶閃光的細(xì)砂粒在液滴中滾動,，即為陽性反應(yīng),；如果液滴仍呈濃墨汁狀團(tuán)集一起，則為陰性反應(yīng),。

炭凝集反應(yīng)的最大特點(diǎn)是,，對標(biāo)本的純度要求不甚嚴(yán)格,，受雜質(zhì)的干擾較小。不足的方面是敏感性稍差,，只能檢出每毫升含2500萬個鼠疫桿菌,、類鼻疽桿菌或馬流產(chǎn)沙門氏菌，和1億個布魯氏菌和霍亂弧菌的標(biāo)本等,。

(三) 間接乳膠凝集試驗 是利用直徑為0.6～0.7μm的聚苯乙烯乳膠(polystyrene)作載體,，吸附抗體，制成致敏乳膠診斷液,，檢測含相應(yīng)抗原標(biāo)本的一種間接凝集反應(yīng),。它的原理和操作方法與上述的間接凝集試驗類似，只是采用人工合成的乳膠微球作載體,，而不是天然的紅細(xì)胞或炭粉,。在玻璃板上實施反應(yīng)，當(dāng)致敏乳膠與相應(yīng)抗原相遇,，如乳膠顆粒被凝集,，則好似粉筆末飄浮在水中，為陽性反應(yīng),；液滴仍呈乳狀均等混濁,，則為陰性反應(yīng)。

乳膠凝集反應(yīng)的優(yōu)點(diǎn)在于快速,，數(shù)分鐘即可初報結(jié)果,；操作簡便，無需特殊的儀器設(shè)備,，在基層單位即可進(jìn)行,。所以近幾年來，國內(nèi)外已逐漸用其對沙門氏菌,、炭疽桿菌,、流行性感冒桿菌、嗜肺軍團(tuán)桿菌,、腦膜炎雙球菌,、肺炎球菌、葡萄球菌腸毒素(2×10^-4μg/ml)和嗜鹽桿菌等作鑒定,，以及對鉤端螺旋體患者血清抗體作檢測,。不足的方面是，聚苯乙烯乳膠的性質(zhì)較脆弱,，易受反應(yīng)環(huán)境中存在的雜質(zhì)的干擾,，發(fā)生非特異性自家凝集，出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。