BCA 蛋白定量法是一種快速靈敏,、穩(wěn)定可靠的蛋白定量測定方法,，其測定范圍是10－2000ug/ml，是比Lowry 法更*的專用于檢測總蛋白質(zhì)含量的產(chǎn)品,。

　　BCA 蛋白定量測定方法：（96孔板）

　　1,、配制BCA 工作液: 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，按50 體積試劑A,，1 體積試劑B 配制適量BCA 工作液,，充分混勻,。

　　2、將蛋白標(biāo)準(zhǔn)品按0, 1, 2, 4, 6,，8, 10 微升加到96 孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中,，加滅菌雙蒸水補(bǔ)足到10 微升；取10 微升待測樣品加入96 孔板,。每個測定要做2-3 個平行,。

　　3、向帶測樣品孔和蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入200 微升BCA工作液（即樣品與工作液的體積比為1：20）混勻,。

　　4,、37℃溫浴30min。冷取至室溫,。

　　5,、酶標(biāo)儀562nm 波長下測定吸光度。

　　6,、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中求出樣品濃度。

　　BCA 蛋白定量測定操作注意事項(xiàng)：

　　1,、反應(yīng)顏色的深淺除了與樣品的蛋白質(zhì)濃度相關(guān)外,，還與反應(yīng)的溫度有關(guān)。如果樣品的濃度較高（>50μg/ml）,，反應(yīng)溫度一般采用37 度,。如果樣品蛋白質(zhì)的濃度較低（<50μg），反應(yīng)的溫度為60℃,，該溫度下,，色氨酸、酪氨酸和肽鍵得到充分氧化,，大大提高檢測靈敏度,。

　　2、該方法檢測的蛋白質(zhì)濃度范圍20μg-500μg/ml,；當(dāng)?shù)鞍诐舛龋?0ug/ml 時,，推薦60℃溫浴,，并將蛋白液：工作液的比例調(diào)至1：8 進(jìn)行測定（增強(qiáng)法）可以檢測到5ug/ml,。

　　試劑A 和B 在室溫的穩(wěn)定期至少1 年以上。標(biāo)準(zhǔn)蛋白液保存在－20℃,短期則4℃保存,。