細胞株在體外進行培養(yǎng),，失去了機體的調節(jié)和控制,，因此，除滿足營養(yǎng)的要求外,，還必須使細胞生存環(huán)境晝接近活體的環(huán)境,。外環(huán)境的培養(yǎng)條件如溫度,、滲透壓、酸堿度等均能影響細胞的生長,。

　　一,、溫度：

　　一般哺乳類及禽類細胞體外培養(yǎng)的適宜溫度是37~38℃。溫度過高或過低都會影響到細胞的生長,。細胞耐受低溫的能力比抗熱的能力強,，在低溫下，細胞的代謝活力及核分裂降低,。溫度低于0℃時,，雖影響細胞代謝，但并無傷害作用,。把細胞置于23~25℃時,，細胞仍能生存和生長，但速度減緩,，不過,，魚類細胞的適宜培養(yǎng)溫度為23~25℃。

　　若溫度過低,，在降到冰點以下時,，細胞因胞外水和胞質結冰而受損死亡，但若向培養(yǎng)基中加入甘油或二甲基亞砜（DMSO）等保護劑,，封入安瓿中后,，置于液氮或低溫冰箱（-70℃）中，可起保護作用,，此時細胞可而耐受-70℃以下溫度,，能長期儲存，解凍后細胞復蘇,，仍能繼續(xù)生長增殖,，細胞物性狀不受任何影響。此為保存細胞的主要手段,。

　　高溫對細胞培養(yǎng)不利,。細胞在39~40℃培養(yǎng)1h，會受到一定損傷,，但仍有可能恢復,，但不能忍受溫度再升高2℃，持續(xù)數小時,，即在41~42℃培養(yǎng)1h,，細胞操作嚴重，溫度到43℃以上時細胞多數被殺死,。高溫主要引起酶的滅活,、類脂質破壞,、核分裂的破壞，產生凝固酶使細胞發(fā)生凝固,，另外使蛋白質變性,。因此，體外培養(yǎng)細胞時一定要避免高溫,。

　　二,、滲透壓：

　　細胞在高滲透溶液中低滲溶液中，可以立即發(fā)生皺縮或腫脹,、破裂,。所以，滲透壓是體外細胞培養(yǎng)的重要條件,。哺乳動物和其他動物組織細胞體外孫女培養(yǎng)的滲透壓的維持主要與NaCl有關,，但不能忽視其他電解質與滲透壓的關系，滲透壓與單位體積溶劑內溶質的分子數和離子婁成正比,。

　　為此,，按一定比例控制培養(yǎng)基中離子平衡，維持正常滲透壓是很重要的,。這不僅是為了維持細胞張力,，而且是為了調節(jié)細胞的代謝。因為細胞外離子輸送和離子濃度改變著其他營養(yǎng)物質的輸送（如氨基酸,、糖等）,，直接影響細胞基本合成系統(tǒng)。

　　理想的滲透壓因細胞的類型及種族而異,，人血漿滲透壓為290mmol/L,，被視為是體外培養(yǎng)人類細胞的理想滲透壓，哺乳動物細胞的滲透壓一般為290~300mmol/L,，人胚肺成纖維細胞為250~325mmol/L,，鼠細胞則為310mmol/L左右。在實際應用中,，260~320mmol/L的滲透壓可適于大多數細胞,。常用培養(yǎng)基的滲透壓值見表2-3。

　　三,、氣體環(huán)境和PH值：

　　體外培植細胞需要理想的氣體環(huán)境,，氧和二氧化碳石細胞生存必需的條件。

　　1,、氧：

　　氧參加細胞的三羧酸循環(huán)，產生能量以供應給細胞生長,、增殖和合成各種所需成分,。有些細胞在低氧條件下,，可借糖酵解取得能量，單多數細胞低氧時不能生存,。氧張力通常維持在略低于大氣狀態(tài),，若氧分壓超過大氣中氧的含量可能對有些細胞有害。

　　2,、二氧化碳：

　　采用開放式培養(yǎng)時（碟或培養(yǎng)瓶松蓋培養(yǎng)或培養(yǎng)板培養(yǎng)）,，一般要把細胞置于95%空氣加5%二氧化碳的混合氣體環(huán)境中。CO2既是細胞的代謝產物,，又是細胞生長所必需的成分,，并與維持培養(yǎng)基的pH值有關。在密閉瓶中CO2濃度偏低的情況下,，細胞容易生長,，一般不能低于1%，否則有損細胞,。CO2增加將使pH值下降,。

　　3、pH值：

　　大多數細胞適于在pH7,。2~7,。4條件下生長，低于pH6,。8或高于pH7,。6對細胞有害，甚至退變或死亡各種細胞對pH值的要求不盡相同,。一般原代培養(yǎng)細胞對pH值的堿性的耐受比對酸性的耐受差,，偏酸的環(huán)境比偏堿的環(huán)境對細胞生長有利。為了維持培養(yǎng)環(huán)境恒定的pH值,，多采用在培養(yǎng)基中加入磷酸鹽等緩沖劑的方法,。

　　四、無毒和無菌：

　　無毒和無菌是體外培養(yǎng)細胞的首要環(huán)境條件,。細胞在深入活體內,，細胞株偶爾有細菌或有害物質入侵，因體內有強大的解毒系統(tǒng)和免疫系統(tǒng),，可將其解毒或清除,，而不易受損害。但在離體的環(huán)境中,，失去了防御系統(tǒng),，一旦有害物質入侵或細菌污染，可導致細胞死亡，前功盡棄,。

　　如培養(yǎng)瓶,、培養(yǎng)皿、支持物,、培養(yǎng)基,、瓶塞上有細胞毒性，在培養(yǎng)過程中可導致細胞死亡因此,，在選用這些器皿,、材料時要注意，若這些物品消毒不徹di,，帶菌或操作過程不小心使細胞污染,，也會導致細胞死亡。若出現交叉污染,，可使實驗室原來的細胞系失去原有特性,，應引起足夠的重視。