細胞傳代培養(yǎng)的流程和注意事項如下：
1、當(dāng)細胞密度達到其生長密度高處時（一般腫瘤細胞為80-100%,，原代細胞和干細胞為80-90%,，有些細胞為40-50%,，熟知所養(yǎng)細胞的生長密度極限），移除舊培養(yǎng)液；
2、用PBS洗滌兩次（舊培養(yǎng)中的鈣離子會抑制胰酶的活性）,，加入1ml胰酶消化液（以T25培養(yǎng)瓶為例），立即蓋好蓋子,，把培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下觀察,，如大部分細胞變圓，立即移除胰酶消化液（如大部分細胞漂起,，可不移除胰酶消化液）,，加入5ml預(yù)熱培養(yǎng)基，用吸管取培養(yǎng)液吹打瓶壁細胞,，使其脫離瓶壁形成單細胞懸液,，離心，小心移除上清,；
3、加入5ml預(yù)熱培養(yǎng)基,，吹打重懸細胞用細胞計數(shù)板在顯微鏡下計算細胞數(shù),，分裝入T25培養(yǎng)瓶中，添加基至總體積為5ml,，置于37℃,、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；傳代1次,。

注意事項：
1.熟知所養(yǎng)細胞的生長密度高處,；
2.第一次進行所養(yǎng)細胞傳代時，消化時必須把培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下觀察,，并記錄所需時間,，下次按照該時間執(zhí)行即可；
3.進行細胞傳代時必須結(jié)合考慮細胞生長密度需求（啟動正常生長所需的密度）和實際的工作需求,，在滿足細胞生長密度需求的前提下,，需要多少瓶就傳多少瓶，降低工作強度和試劑耗材消耗,；
4.離心速度和時間依據(jù)具體細胞決定,。