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ELISA實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法
酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay,，ELISA)是免疫學(xué)和分子生物學(xué)中廣泛使用的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，由Eva Engvall和 Peter Perlmann 于1971年描述,。該測(cè)定依賴于抗原-抗體相互作用的原理,，并利用酶和比色檢測(cè)來(lái)量化目標(biāo)分子,，主要用于檢測(cè)和量化生物樣品中特定蛋白質(zhì)、肽,、抗體或抗原的存在,。ELISA測(cè)定通常應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域，包括臨床診斷,、藥物研究和生命科學(xué)基礎(chǔ)研究,。那么你知道ELISA實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法嗎？讓我們一起來(lái)看看吧,！
一,、高背景
原因：洗板不充分、Streptavidin-HRP 加樣量過(guò)高,、孵育時(shí)間是否過(guò)長(zhǎng),、樣本的交叉污染
解決方法：檢查洗板是否按要求進(jìn)行；洗板不充分,；濃縮洗滌液有結(jié)晶就使用,，導(dǎo)致洗滌不充分；檢查SA-HRP是否按要求的濃度配制,；檢查孵育時(shí)間是否按要求進(jìn)行,；注意實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能造成樣本交叉孔間反應(yīng)的操作。
二、無(wú)信號(hào)值
原因：試劑使用順序錯(cuò)誤,、試劑配制錯(cuò)誤,、試劑配制濃度錯(cuò)誤
解決方法：檢查試劑使用順序是否存在問(wèn)題，重復(fù)測(cè)試,；檢查是否存在試劑配制錯(cuò)誤,；檢查試劑是否因標(biāo)準(zhǔn)蛋白、抗體或SA-HRP濃度配制過(guò)低造成信號(hào)值無(wú),。
三,、過(guò)強(qiáng)的信號(hào)值
原因：洗板不充分、TMB底物變質(zhì),、Streptavidin-HRP 加樣量過(guò)高
解決方法：
洗板不充分,，造成SA-HRP殘留。檢查洗板是否按要求進(jìn)行,；如使用洗板機(jī),，請(qǐng)充分沖洗管路并確保每個(gè)孔都被全部沖洗；TMB底物是否存在變藍(lán),，使用新的底物試劑,；避免使用金屬物質(zhì)接觸底物造成變質(zhì)失效；檢查SA-HRP是否按要求的濃度配制,；檢查加樣量是否按要求進(jìn)行,。
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