液相色譜儀由高壓液體泵、檢測器及液相色譜柱等三部分組成,，其中液相色譜柱的正確安裝和使用,，是液相色譜工作的關鍵,；也是液相色譜工作者獲得正確可靠的實驗數(shù)據(jù)的必經(jīng)之路。
     一,、液相色譜柱的安裝：
     1,、液相色譜柱的結(jié)構(gòu)：
     a、空柱由柱接頭,、柱管及濾片組裝而成,。
     柱接頭采用低死體積結(jié)構(gòu)，柱接頭是兩端螺紋組件,，一端是為7/16英寸外螺紋,，另一端是3／16英寸的內(nèi)螺紋(國內(nèi)外已規(guī)范化)。7／16英寸外螺紋與1／4英寸柱管(Φ6.35mm)連接,，中間放置壓壞用于密封,。3／16英寸的內(nèi)螺紋與1／16英寸(Φ1.57mm)的連接管連接，中間也放置壓環(huán)用于柱接頭的密封,。為了盡量減少柱外死體積,，在安裝色譜柱時，用Φ1.57mm連接管通過空心螺釘壓環(huán)后要盡量插到底,，然后再擰緊空心螺釘。壓環(huán)被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上(連接管通過壓環(huán)后露出的管長度應嚴格控制在2．5mm長或其他固定尺寸),。
     在兩端柱接頭內(nèi),，柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片(或濾網(wǎng))，用于封堵柱填料不被流動相沖出柱外而流失,?？罩鹘M件均為316#不銹鋼材質(zhì)，能耐受一般的溶劑作用,。但由于含氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性,，故使用時要注意，柱及連接管內(nèi)不能長時間存留此類溶劑,，以避免腐蝕,。
     b、柱填料：
     液相色譜柱的分離作用是在填料與流動相之間進行的,，柱子的分類是依據(jù)填料類型而定,。
     正相柱：多以硅膠為柱填料。根據(jù)外型可分為無定型和球型兩種,，其顆粒直徑在3—10 µm的范圍內(nèi),。另一類正相填料是硅膠表面鍵合—CN，-NH2等官能團即所謂的鍵合相硅膠,。
     反相柱：主要是以硅膠為基質(zhì),，在其表面鍵合十八烷基官能團(ODS)的非極性填料。也有無定型和球型之分。
     常用的其他的反相填料還有鍵合C8,、C4,、C2、苯基等,，其顆粒粒徑在3—10 µm之間,。
     2，色譜柱的安裝：
     a,、拆開柱包裝盒,，確認色譜柱的類型、尺寸,、出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑,。
     b、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用,。
     c,、 按柱管上標示的流動相流向，將色譜柱的入口端通過連接管與進樣閥出口相連接(如條件允許,，建議在柱前使用保護柱),；柱的出口與檢測器連接。連接管是外徑為1.57mm,、內(nèi)徑為0.1-0.3mm的不銹鋼管,。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán)。在接管時一定要設法降低柱外死體積,。連接管通過空心螺釘,、壓環(huán)后盡量用力插到底，然后順時針擰緊空心螺釘,，直到擰不動為止,，再用扳手繼續(xù)順時針擰1／4-1／2圈，切記不要用力過大,。如色譜柱通過流動相加壓后有漏液現(xiàn)象,，請用扳手繼續(xù)順時針擰1／4圈，直至不漏液為止,。
     二,、液相色譜柱的使用：
     色譜柱在使用前，進行柱的性能測試,，并將結(jié)果保存起來,，作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品,、流動相,、柱溫等條件的差異而有所不同,；另外，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是*條件),，只有這樣,，測得的結(jié)果才有可比性。
     1,、樣品的前處理：
     a,、使用流動相溶解樣品。
     b,、使用予處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì),。
     、使用0.45µm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì),。
     2,、流動相的配制：
     液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點：
     a,、流動相對樣品具有一定的溶解能力,，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。
     b,、流動相具有一定惰性,，與樣品不產(chǎn)生化學反應(特殊情況除外)。
     c,、流動相的黏度要盡量小,，以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果；同時降低柱壓降,，延長液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度),。
     d,、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應,。如使用UV檢測器，使用對紫外吸收較低的溶劑配制,。
     e,、流動相沸點不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡,，導致實驗無法進行,。
     f、在流動相配制好后,，一定要進行脫氣,。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用,。
     3,、流動相流速的選擇：
     因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱,，要追求*柱效,，使用*流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,，流速一般選擇1ml／min,，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml／min為佳,。
     當選用*流速時,，分析時間可能延長?？刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆姸鹊姆椒ㄒ钥s短分析時間(如使用反相柱時,，可適當增加甲醇或乙腈的含量)。