BUNSEN小課堂:實驗室酶標板的使用注意事項
根據(jù)不同的分類標準,,酶標板有著不同的分類,。
一,、根據(jù)孔數(shù),,可分為96孔,、48孔,,其中96孔是現(xiàn)在常用的,因為酶標板就是配合酶標儀用,,現(xiàn)在的酶標儀做出來的最多的是96孔,,所以客戶在購買時也是要96孔板,廠家也為了適應市場基本上做出來的就是96孔的,。
二,、根據(jù)其底部的不同,又分為平底的,,U型底,、V型底。平底的折射率低,適于在酶標儀檢測;U型底的酶標板折射率較高,,方便加樣,、吸樣、混勻等操作,,可以不用放在酶標儀上,,直接通過目測觀察顏色變化情況,從而判定有無相應的免疫反應,。V底的酶標板可以精確的吸取樣品,。
三、根據(jù)酶標板與蛋白和其它分子結合能力的不同,,又分為高結合力,,中結合力和氨基化的。
1) 高結合力
此種酶標板,,表面經(jīng)處理后,,其蛋白結合能力大大增強,可達300~400ng IgG/cm2,,主要結合的蛋白分子量>10kD,。使用該類酶標板可提高敏感性,并可相對減少包被蛋白的濃度和用量,,不足之處為較易產生非特異性反應,。抗原或抗體包被后,,以非離子去污劑無法有效地封閉未結合蛋白的部位,,需使用蛋白作為封閉劑。
2) 中結合力
此類酶標板經(jīng)表面疏水鍵被動與蛋白結合,,適合作為分子量>20kD的大分子蛋白的固相載體,,其蛋白結合能力為200~300ng IgG/cm2。由于該類酶標板所具有的僅與大分子結合的特性,,適用于作為未純化抗體或抗原的固相載體,,可降低潛在的非特異性交叉反應。該類板可以惰性蛋白或非離子去污劑作為封閉液,。
四,、另外根據(jù)顏色又分為透明、黑色,、白色,。
透明的是常用的,用于最一般的酶聯(lián)免疫實驗,。相對于透明的的板子,,還有用于發(fā)光檢測用的不透明的板子,,一般有黑色和白色兩種。黑色的酶標板自身會有光吸收,,所以它的信號相對于白色的板子要低很多,,因此一般用于檢測較強的光,如熒光檢測,。而白色的酶標板就用于較弱的光檢測,,常用于一般的化學發(fā)光。另外黑色的酶標板還可以消弱非特異反應帶來的問題,。有些客戶會問,,用一般的酶標板可不可以進行發(fā)光檢測,回答是不可以的,,因為一般從化學發(fā)光反應中發(fā)射出的光是各向同性的,,也就是說各個方向上同等發(fā)射出來的。如果用透明的板子,,光不僅會從垂直方向發(fā)散,,還從水平方向發(fā)散出來。很容易的就會通過各個孔之間的間隙和孔壁,。這樣的話,,光較強時相鄰孔之間的影響就會很大,因此不能用透明的酶標板來進行化學發(fā)光實驗,。
五,、一般酶標板大多是可以拆卸的,,也就是單條可以拆下來,,也有固定的板子。單條可拆的的板子其實可以省下許多錢,,因為這樣的話,,當你想用新的酶標板時,可以將酶標板條拆下來,,買些酶標板條就可以了,,只是要考慮要配相同的型號即可。另外,,可拆的酶標板可以用來做體外檢測,,方便拆卸。
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