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Science子刊,！單個外泌體表征分析技術(shù)助力卵巢癌外泌體研究取得重要進(jìn)展
外泌體是包含了復(fù)雜 RNA 和蛋白質(zhì)的小膜泡，是細(xì)胞間信號傳輸?shù)妮d體,。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,，它們廣泛存在于血液、唾液,、尿液,、腦脊液和乳汁等體液中，參與細(xì)胞間通訊,。近年來,，外泌體的研究熱度持續(xù)攀升，已成為當(dāng)前生命科學(xué)和基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究的一大熱點,，在 2023 年國家自然科學(xué)基金獲批項目中,，外泌體研究相關(guān)項目的總數(shù)近 390 個，立項的總金額突破 1.5 億元,。但由于外泌體的尺寸（ 30~200 nm ）,，常規(guī)的光學(xué)顯微鏡無法對其進(jìn)行成像分析，因此很少有技術(shù)能夠?qū)蝹€外泌體進(jìn)行物理表征和蛋白分型,。
美國NanoView Biosciences 公司推出的全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng) ExoView采用特殊的 SP-IRIS 成像技術(shù),，只需要少量樣品即可一次完成外泌體計數(shù)、粒徑,、蛋白表達(dá),、蛋白共定位、亞群分布的分析,。全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng) ExoView 于 2018 年被推出后,，便引起了外泌體領(lǐng)域科研工作者的廣泛關(guān)注，目前在全球已近 100 多個實驗室采用該技術(shù),，發(fā)表文獻(xiàn)超過 290 篇,。在過去的 2023 年，使用 ExoView 發(fā)表的論文出現(xiàn)井噴性增長，短短數(shù)月已經(jīng)發(fā)表了超過 93 篇,。近期,，Akira Yokoi團隊[1]利用該系統(tǒng)在卵巢癌外泌體研究領(lǐng)域取得重要進(jìn)展，成果發(fā)表于高水平期刊《Science Advances》上,。
全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng) ExoView 系統(tǒng)
■ 通過聚酮涂層納米線識別高級別漿液性卵巢癌分泌的特異性外泌體
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早期卵巢癌是最容易治療的,，但其很難被發(fā)現(xiàn)和診斷，因此開發(fā)新的診斷方法非常緊迫,。癌細(xì)胞源性的外泌體 ( EV ) 具有特殊的蛋白質(zhì)特征,，其作為疾病生物標(biāo)志物具有很好的前景。高級別漿液性卵巢癌 ( HGSOC ) 是上皮性卵巢癌的致命亞型,。Akira Yokoi[1]等通過LC-MS/MS 分析來自細(xì)胞系或患者血清及腹水的小型 EV（sEV）和中型/大型 EV ( m/lEV ) 的 HGSOC 特異性膜蛋白,，揭示了兩種 EV 亞型均具有特殊的蛋白質(zhì)組特征，其中 FRα,、Claudin-3 和 TACSTD2 被鑒定為 HGSOC 特異性 sEV 蛋白,。此外，研究人員為了使用簡單易用的微流體裝置分離 EV,，開發(fā)了聚酮涂層納米線 ( pNW ),，可以有效地從生物流體中純化 sEV。使用 pNW 分離的 sEV 的多重陣列檢測對癌癥患者具有特殊的可檢測性并可監(jiān)測其臨床狀態(tài),?？傊?，使用 pNW 的 HGSOC 特異性標(biāo)記物檢測方法可作為臨床檢測生物標(biāo)記物的一個具有前景的平臺,。
其中，研究人員把樣本分成四組,，分別是兩種癌細(xì)胞 ( CAOV3,、 OVCAR3 ) 和兩種非癌細(xì)胞 ( HOSE1 和 MTK )，并利用全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng) ExoView 檢測從四種細(xì)胞系分離出的外泌體,。結(jié)果顯示被 CD63 抗體捕獲的 Claudin-3 陽性外泌體數(shù)量在各組之間幾乎沒有差異,，而 FRα 和 TACSTD2 陽性外泌體更多存在于癌細(xì)胞組別中（ CAOV3 和 OVCAR3 ）（ 圖1 ）。另外,，與其他樣品組對比,，被 CD63 抗體以及 CD81 抗體捕獲的 FRα 和 TACSTD2 陽性外泌體明顯在 OVCAR3 細(xì)胞中更多（ 圖1 ），熒光成像圖對這個結(jié)論進(jìn)行了佐證（ 圖2 ）,。
圖 1 ExoView 檢測從癌細(xì)胞 ( CAOV3 和 OVCAR3 ) 以及非癌細(xì)胞 ( HOSE1 和 MTK ) 分離的外泌體的數(shù)量
圖 2 ExoView對癌細(xì)胞 ( CAOV3和 OVCAR3 ) 以及非癌細(xì)胞 ( HOSE1 和 MTK ) 分離的外泌體進(jìn)行熒光成像分析
在上述這篇文章中,，科學(xué)家借助美國 NanoView Biosciences 公司研發(fā)的全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng) ExoView ，直接檢測樣本中的外泌體,，無需純化,，操作簡單。一次結(jié)果直接輸出外泌體粒徑，絕對數(shù)目,，蛋白表型,，不同亞群的含量、多色熒光成像圖,?？傊似恼掠辛Φ刈C明 ExoView 是外泌體檢測的一大利器,。
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■ 上海大學(xué)在《Journal of extracellular vesicles 》發(fā)表文章
■ 中國科學(xué)院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院在《Lab on a Chip 》發(fā)表文章
■ 北京天壇醫(yī)院,、國家納米科學(xué)中心,、北京航空航天大學(xué)在《Advanced Science 》發(fā)表文章
■ 同濟大學(xué)附屬上海市肺科醫(yī)院、上海思路迪轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)團隊在《Journal of Nanobiotechnology 》發(fā)表文章
■ 山東千佛山醫(yī)院在《NANO LETTERS 》發(fā)表文章
■ 陜西師范大學(xué)在《Food & Function 》發(fā)表文章
■ 南京大學(xué)在《Frontiers in Cell and Developmental Biology 》發(fā)表文章
■ 中山大學(xué)在《ACS NANO 》發(fā)表文章
■ 北京理工大學(xué)在《Acta Pharmaceutica Sinica B 》發(fā)表文章
■ 中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院在《International Journal of Nanomedicine 》發(fā)表文章
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參考文獻(xiàn)：
[1] Akira Yokoi …& Hiroaki Kajiyama. (2023) Identifying high-grade serous ovarian carcinoma– specific extracellular vesicles by polyketone-coated nanowires. SCIENCE ADVANCES, 9, eade6958.
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1. 全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)
2. ExoView外泌體全面表征試劑盒
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