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吐溫20在WB中的作用是什么,?

來(lái)源:深圳市安培生物科技有限公司   2024年03月20日 14:57  

  Western blot 實(shí)驗(yàn)中常用的洗液 TBST 是一種實(shí)驗(yàn)室配制液體,其配方大體相似,,其中一種組成成分是 Tween-20,,它是一種黃色或琥珀色的透明油狀液體,有特殊的氣味和輕微的苦味,。使用移液器吸取時(shí)會(huì)感覺(jué)到一種滯后感,。


   Tween-20 ,,也稱Polyethylene glycol sorbitan monolaurate,,中文名為吐溫-20或吐溫20。為非離子型表面活性劑,,大白話就是:它的作用就是洗掉非特異性結(jié)合的蛋白質(zhì),。其在 Western blot 實(shí)驗(yàn)里的作用原理如下:它可以通過(guò)降低溶液表面張力,使抗體更容易擴(kuò)散并結(jié)合到膜上的目標(biāo)蛋白,,同時(shí)減少非特異性結(jié)合,,從而提高檢測(cè)的特異性和信噪比。


   在WB洗液里的吐溫是和BSA一樣,,對(duì)抗原抗體蛋白提供保護(hù)作用,,同時(shí)因?yàn)槭潜砻婊钚詣ㄋ颈P加成親水的環(huán)氧乙烷基團(tuán)后的化合物),可以減少抗體對(duì)抗原的非特異性作用,用于洗脫未結(jié)合的抗體,、減少非特異性結(jié)合,。
   如果抗體濃度過(guò)高或封閉不充分導(dǎo)致背景過(guò)高,可以通過(guò)降低抗體稀釋度,、增加洗膜次數(shù)和Buffer用量,,或在Wash Buffer中添加終濃度0.05%的Tween-20來(lái)改善。

   雖然 WB 是一類基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn),,但是基礎(chǔ)并不代表簡(jiǎn)單,。翻車的主要原因在于 WB 的步驟實(shí)在繁瑣:從配置蛋白膠開始,到蛋白電泳,、蛋白轉(zhuǎn)膜,、抗體孵育,一整套流程下來(lái)花費(fèi) 1~2 天的時(shí)間才能進(jìn)行最后的顯影,。這些環(huán)節(jié)中但凡有一個(gè)出錯(cuò),,就會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)的失敗。

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