LUCS 13 是一種可滲透細胞的核酸染料,，在與核酸結(jié)合后呈現(xiàn)綠色熒光。該染料具有高熒光產(chǎn)量,，且結(jié)構(gòu)與 SYTO™13 染料相同。

LUCS 13 用于對活的和死的真核細胞以及革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌中的 DNA 和 RNA 進行染色,。染料被 488 nm 的藍色激光激發(fā),。其熒光發(fā)射在熒光素通道中檢測到，與 DNA 結(jié)合時峰值為 509 nm,，與 RNA 結(jié)合時峰值為 514 nm,。

該染料可用于同時標(biāo)記細胞不可滲透的核標(biāo)記物（例如 YoDi-3），以使用熒光顯微鏡和流式細胞術(shù)評估細胞活力,。

協(xié)議

確切的方案取決于具體的細胞類型和實驗任務(wù),。一般來說，可以描述如下：

1. 準(zhǔn)備 50 µM LUCS 13 儲備溶液,。為此,，將 990 µl 去離子水添加到 10 µl 5 mM LUCS 13 溶液中。儲備液可以等分并冷凍以供長期儲存,。

2. 要制備 1 µM LUCS 13 工作溶液,，請將 20 µl 50 µM LUCS13 庫存添加到 980 µl PBS 中。

3. 以合適的方式小心地從生長表面去除貼壁細胞,。對于懸浮細胞,，從下一點開始工作。

4. 用冷 PBS（pH 7.4）清洗細胞一次,。 300 g離心 5 分鐘獲得種子細胞 ,。

5. 將細胞在 1 ml 1 μM LUCS 13 工作溶液中于 37°C 孵育 30 分鐘。

6. 300 g離心 5 分鐘去除染料溶液 ,。

7. 用 PBS 清洗細胞一次,。

8. （可選）如有必要，可以將細胞在含 3.7% 甲醛的 PBS 中固定 15 分鐘,，用 PBS 洗滌,，然后用另一種染色劑重新染色。

重要的

• 處理 LUCS 13 溶液時請使用塑料瓶,，因為稀釋的染料可能會粘在玻璃上,。

• 使用無磷酸鹽緩沖液（例如鹽水中的 15 mM HEPES）可獲得更明亮的染色結(jié)果。

• 在開始實驗之前,，測試幾種染料濃度范圍從 10 nM 到 5 µM,，以確定最佳的染料稀釋度。染色結(jié)果受許多因素影響：生長培養(yǎng)基,、細胞密度,、其他細胞類型的存在、染色持續(xù)時間等,。