dsGreen 是一種特異性結(jié)合雙鏈 DNA 的熒光染料。染色方案有三種變體:凝膠浸泡,、凝膠預(yù)染色和樣品預(yù)染色,。
凝膠浸泡
瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠的經(jīng)典方法。
在瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠中運行樣品,。
在燒杯中,,將 10 µL 10,000× dsGreen DMSO 溶液添加至 100 mL 1× TE、TBE 或 TAE 緩沖液(對于小型凝膠),,或?qū)?50 µL 10,000× dsGreen DMSO 溶液添加至 500 mL 1 × TE,、TBE 或 TAE 緩沖液(用于中型凝膠)。用抹刀,、棒或磁力攪拌器充分混合,。
將稀釋的 dsGreen 溶液倒入適當(dāng)?shù)耐斜P或平底鍋中,并浸沒凝膠,。
將凝膠浸泡 5-10 分鐘,。
使用可用光源和綠色/黃色濾光片查看或記錄凝膠。藍光透射儀或紫外低壓汞燈 (254 nm) 可用于可視化 dsGreen 染色的凝膠,。也可以使用高壓汞燈(365 nm),,但這種光源的激發(fā)效率稍低。
凝膠預(yù)染色
該方法僅適用于瓊脂糖凝膠,,不適用于 PAAG,。注意——這種染色方法有時會導(dǎo)致條帶變形或形成污點。在這種情況下使用凝膠浸泡,。
使用微波爐或加熱裝置將緩沖液中的瓊脂糖煮沸至溶解,。
在仍為液體時,每 10 mL 凝膠溶液添加 1 µL 10,000× dsGreen DMSO 溶液,。充分混合,。
倒入凝膠并使其凝固。
為了獲得最佳結(jié)果,,在陽極附近每 10 mL 緩沖液中添加 1 µL 10,000× dsGreen DMSO溶液(“+”,,紅線)。
運行示例,??梢栽?254 nm 低壓汞燈下實時監(jiān)測遷移帶,。
使用可用光源和綠色/黃色濾光片查看或記錄凝膠。藍光透射儀或紫外低壓汞燈 (254 nm) 可用于可視化 dsGreen 染色的凝膠,。也可以使用高壓汞燈(365 nm),,但這種光源的激發(fā)效率稍低。
樣品預(yù)染色
不敏感,、且經(jīng)濟的方法,。
在 DMSO 中混合 25 µL DMSO 和 1 µL 10,000× dsGreen 溶液。
將 1 µL 溶液添加到每個要在瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠上分離的樣品中,。
運行示例,。可以在 254 nm 低壓汞燈下實時監(jiān)測遷移帶,。
使用可用光源和綠色/黃色濾光片查看或記錄凝膠,。藍光透射儀或紫外低壓汞燈 (254 nm) 可用于可視化 dsGreen 染色的凝膠。也可以使用高壓汞燈(365 nm),,但這種光源的激發(fā)效率稍低,。
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