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人縮宮素(OT)Elisa試劑盒說明書

來源:上海雅吉生物科技有限公司   2012年02月01日 09:28  

人縮宮素(OT)Elisa試劑盒說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍: 96T
1.5ng/L - 40ng/L
使用目的:
本試劑盒用于測定人血清,、血漿及相關液體樣本中縮宮素(OT)含量。
實驗原理
人縮宮素(OT)Elisa試劑盒說明書
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人縮宮素(OT)水平,。用純化的人縮宮素(OT)抗體
包被微孔板,,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入縮宮素(OT),,再與HRP 標記的
縮宮素(OT)抗體結合,,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB 顯色,。
TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色,,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣
品中的縮宮素(OT)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),,通過標準曲
線計算樣品中人縮宮素(OT)濃度,。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品(80ng/L) 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,,提取后應盡快進行實驗,。若不能
馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3 的樣品,,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋,。
40ng/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液
20ng/L 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
10ng/L 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
5ng/L 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
2.5ng/L 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同),、標準孔,、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,
然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,,盡
量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。
4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,甩干,,每孔加滿洗滌液,,靜置30 秒后棄去,如此
重復5 次,,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,,空白孔除外,。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5,。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值),。 測定應在加終止
液后15 分鐘以內進行,。
操作程序總結:
計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,,在坐標紙上繪出標準曲線,,根據樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數,;或用標準物的濃度與OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式,,將樣品的OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,,再乘以稀釋倍數,,
即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,,酶標包被板開封后如未
用完,,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,,稀釋時可在水浴中加溫助溶,,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,,并經常校對其準確性,,以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5 分鐘內,,如標本數量多,,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,,做復孔,。如標本中待測物質含量過高(樣本OD 值
大于標準品孔*孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,,計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5),。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染,。
6.底物請避光保存,。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:,;2-8℃,。
2.有效期:6 個月人縮宮素(OT)Elisa試劑盒說明書

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