細菌內毒素檢測（BET,，Bacterial Endotoxins Testing）的創(chuàng)新技術問世后,，證明平臺間檢測的等效性就變得至關重要,。“Sievers^® Eclipse比例確認測試”旨在確認使用96孔板時的樣品與鱟試劑的1:1比例始終對使用Eclipse微孔板也同樣有效,。只要保持1:1比例,，就能使樣品和鱟試劑（LAL,，LimulusAmoebocyte Lysate，鱟變形細胞溶解物）之間的生物化學反應保持不變,。即使在使用Sievers Eclipse平臺時減少光學孔的總容積,，每個孔中的1:1比例也能保持不變,，用戶可以確信樣品和標準品的內毒素測量值是準確有效的,。

使用96孔板的動態(tài)顯色法細菌內毒素檢測技術，要求在每個孔中加注標準品或樣品與鱟試劑的混合液,，然后觀察液體的顏色變化,。檢測成功的關鍵在于精確控制樣品和鱟試劑的用量。USP <85>規(guī)定,，對于某些檢測參數（例如體積比,、反應起效時間、pH值等）,，應遵循鱟試劑生產商提供的使用說明（IFU,，Instructions for Use）。

有的使用說明指示用戶準備1:1樣品與鱟試劑混合液時,，建議使用100 µL（而非典型的200 µL）作為孔的總容積,，并指出100 µL有助于達到最佳的檢測靈敏度。該使用說明表明,，1:1的比例關系（而非孔的總容積）才是檢測成功的關鍵,。只要每個孔中的樣品和鱟試劑的比例是1:1，反應就能準確進行,，產生的結果就是等效的,。

如果比例不是1:1，那么樣品與鱟試劑的用量就不對,，就會對反應動力學過程和整體檢測結果產生顯著影響,。除了孔的總容積之外，還需考慮反應速度,。如果反應較快,，那么起始反應時間就較短，內毒素濃度就較高,。如果反應較慢,，則情況相反——起始反應時間較長,，內毒素濃度較低。

錯誤的比例還會影響鱟試劑在與樣品混合時的自然緩沖能力,。如果達不到1:1的精確比例,，則反應混合液的pH值就不在建議的6-8范圍之內，就會影響檢測的整體反應動力學過程,。

1:1比例確認測試旨在證明在Sievers Eclipse微孔板的104個孔中都達到了鱟試劑和樣品的1:1精確比例,。進行測試時，用戶需要一個新的Sievers Eclipse微孔板和Sievers Eclipse 1:1比例確認套件,，該套件包括一個水瓶和一個染色劑瓶,。開始分析之前，Eclipse軟件會指導用戶在對應的位置和鱟試劑LAL端口,，完成水和染色劑的準備和注射,。然后，Eclipse微孔板按照正常分析時的步驟運行,。1:1比例確認測試不依賴于動力學酶促反應,，因此測試所需的總時間較短。

分析完畢后,，Eclipse軟件的“1:1比例結果（1:1 Ratio Results）”選項卡中會顯示報告,。報告內容除了包括在運行測試之前輸入的常規(guī)信息（例如分析儀序列號、Eclipse微孔板信息,、1:1比例確認樣品信息）,，還包括104個光學孔的各自的平均光密度。

Sievers Eclipse微孔板是精密設計的微流控液體處理設備。此款微孔板利用計量分配腔,，以恒定的通道幾何形狀和運動方式,，將精確等量的樣品和鱟試劑同時送到光學孔中。正是Eclipse微孔板的精密的液體控制能力,，確保了每次檢測的所有104個光學孔中都達到樣品與鱟試劑的1:1關鍵性比例,。

鱟試劑生產商提供的使用說明可能會直接表明1:1比例，也可能會指導用戶混合一定量的樣品和鱟試劑,，但液體總體積未必一定是200 µL,。如果光路徑較長，或者為了進行精確移液,，生產商會建議設置較大容積，以提高檢測精度,。對于標準的96孔微孔板來說,，建議設置的孔的總容積在75-200 µL范圍內?！盀榱诉M行有效測量,，建議設置的微孔板的最小孔容積通常大于最大孔容積的1/3?！?sup style="margin: 0px; padding: 0px; outline: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; overflow-wrap: break-word !important; font-size: 12px;">1 所以,，每次檢測的每個孔中的樣品與鱟試劑的比例達到1:1，非常重要,，而沒有必要使用整個孔的容積,。

在Sievers Eclipse平臺上進行1:1比例確認測試的結果證明，即使孔的總容積顯著減小,，每次檢測的每個光學孔中都能達到至關重要的1:1比例,。始終保持1:1的精確比例，用戶就能確認在轉換平臺時,，生物化學過程是等效的,。建議每年由Sievers分析儀認證的現場服務工程師或代表來完成此項確認測試任務。