研域生物幫您收集整理溫育的豬ELISA試劑盒的保溫溫度在豬ELISA試劑盒中一般有3次加樣步聚，即加標(biāo)本,，加酶結(jié)合物,，加底物。加樣時應(yīng)將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部,，避免加在孔壁上部,，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡,。

加標(biāo)本一般用微量加樣器,，按規(guī)定的量加入板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴,，以免發(fā)生交叉污染,，也可用一次性的定量塑料管加樣（一般不建議使用）。有些指標(biāo)檢測（如間接法ELISA試劑盒）需用稀釋的血清,，可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣,。也可在板孔中加入稀釋液,，再在其中加入血清標(biāo)本，然后在微型震蕩器上震蕩1min,。加酶結(jié)合物工作液和底物工作液時可用多道移液器,，使加液過程在短時間內(nèi)完成。

溫育常采用的溫度有43℃,、37℃,、室溫和4℃（冰箱溫度）等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度,。在建立ELISA試劑盒方法作反應(yīng)動力學(xué)研究時，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時,，產(chǎn)物的生成可達(dá),。為加速反應(yīng)，可提高反應(yīng)的溫度,，有些試驗在43℃進(jìn)行,，但不宜采用更高的溫度?？乖贵w反應(yīng)4℃更為*,，在放射免疫測定中多使反應(yīng)在冰箱中過夜，以形成的沉淀,。但因所需時間太長,，在ELISA試劑盒中一般不予采用。

保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外,，一般均采用水浴,，可將豬ELISA試劑盒板置于水浴箱中，ELISA試劑盒板底應(yīng)貼著水面,，使溫度迅速平衡,。為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋,，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,，此時可讓反應(yīng)板漂浮在水面上。若用保溫箱,，ELISA試劑盒板應(yīng)放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等,，在盒底墊濕的紗布,，將ELISA試劑盒板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)定的溫度,，特別是在氣溫較低的時候更應(yīng)如此,。為避免酶標(biāo)板底部受水汽或磨損導(dǎo)致的讀數(shù)誤差，一般采用鼓風(fēng)恒溫箱保溫，這個過程必須在酶標(biāo)板上方貼封紙,，以免蒸發(fā),。無論是水浴還是濕盒溫育，反應(yīng)板均不宜疊放,，以保證各板的溫度都能迅速平衡,。室溫溫育的反應(yīng)，操作時的室溫應(yīng)嚴(yán)格限制在規(guī)定的范圍內(nèi),，標(biāo)準(zhǔn)室溫溫度是指20-25℃,，但具體操作時可根據(jù)說明書的要求控制溫育。室溫溫育時,，ELISA試劑盒板只要平置于操作臺上即可,。溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。

豬ELISA試劑盒屬固相免疫測定,，抗原,、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,，加入板孔中的標(biāo)本,，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機會，只有貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸,。這是一個逐步平衡的過程,，因此需經(jīng)擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的終點。在其后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此,。這就是為什么ELISA試劑盒反應(yīng)總是需要一定時間的溫育,。