Greer Labs 屋塵螨(HDM)過(guò)敏原-哮喘模型制備
屋塵螨過(guò)敏原
背景簡(jiǎn)介:
支氣管哮喘(bronchial asthma,,簡(jiǎn)稱哮喘)是一種以嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞反應(yīng)為主的氣道變應(yīng)性炎癥和氣道反應(yīng)性為特征的疾病,。由于哮喘的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,,病因與發(fā)病機(jī)理尚不明了,,臨床實(shí)驗(yàn)受倫理及方法限制,因此需要通過(guò)構(gòu)建哮喘動(dòng)物模型來(lái)研究疾病發(fā)生發(fā)展以及制定相應(yīng)治療措施,。塵螨是最常見(jiàn)的空氣過(guò)敏原,,全球85%的哮喘患者對(duì)塵螨過(guò)敏。屋塵螨是一種免疫復(fù)合物,,能夠激活先天免疫和后天免疫應(yīng)答,。研究表明,HDM中的蛋白酶,,如胰蛋白酶樣酶,,催過(guò)敏有促進(jìn)作用,從而導(dǎo)致過(guò)敏幾天對(duì)塵螨的過(guò)敏反應(yīng),。
利用塵螨誘發(fā)動(dòng)物建立哮喘模型,,方法簡(jiǎn)便,,操作性強(qiáng),且成功率高,。
美國(guó)Greer 公司專注于過(guò)敏原檢測(cè),,提供各種動(dòng)物、植物及食品,、真菌等各種過(guò)敏原提取物,。塵螨過(guò)敏原提取物,廣泛應(yīng)用于哮喘模型的制備,。
產(chǎn)品信息:
英文名稱:D.pteronyssinus
中文名稱:屋塵螨
貨號(hào):XPB82D3A2.5 XPB82D3A25 XPB91D3A2.5 XPB91D3A25 XPB81D3A2.5 XPB81D3A25
規(guī)格:2.5ml/25ml
產(chǎn)品應(yīng)用:
1.該產(chǎn)品為凍干粉,一般推薦客戶參照COA中的蛋白濃度做稀釋,,客戶收到貨后用去離子水或蒸餾水稀釋至相應(yīng)工作濃度或儲(chǔ)液濃度。比如:2.5ml包裝的,,加入2.5ml水,,因?yàn)槊總€(gè)批次的蛋白含量有差異,可根據(jù)質(zhì)檢報(bào)告,,計(jì)算終濃度,。客戶也可依據(jù)自身實(shí)驗(yàn)要求,,稀釋到任意濃度,。
2.過(guò)敏原稀釋后,如果一次用不完,,推薦分裝后-20℃保存(可分裝成使用濃度后保存),。可凍融一次,,解凍后,,在一周內(nèi)用完。
3.凍干粉過(guò)敏原效期為10年,。
4.常見(jiàn)的兩個(gè)比較相似的產(chǎn)品:B82 和B84,,B82 和B84,均只代表D.pteronyssinus,,不是實(shí)際訂貨貨號(hào),,D.pteronyssinus產(chǎn)品分粗制品和凍干粉,實(shí)貨都是凍干粉,。凍干粉是粗品進(jìn)一步純化后的產(chǎn)品,。B82和B84在粗品階段,只在純度上有細(xì)微差別,貨號(hào)分別為:RMB82M 和RMB84M,。凍干粉的D.pteronyssinus只有XPB82D3A2.5這一個(gè)貨號(hào)(是由粗品RMB82M純化后獲得,。)
參數(shù)說(shuō)明:
收到貨后,會(huì)有隨貨的質(zhì)檢報(bào)告(COA),。塵螨過(guò)敏原會(huì)有4個(gè)參數(shù)說(shuō)明,,其他類過(guò)敏原,如食物,、花粉類等過(guò)敏原只有2個(gè)參數(shù)(干重和蛋白含量)說(shuō)明,。
以XPB82D3A2.5(Lot#385930)為例,參數(shù)說(shuō)明:
1)純過(guò)敏原(Der P1): 是指純過(guò)敏原Der P1 的含量(當(dāng)然這個(gè)提取物的組分不只是只有Der P1,也有其他形式的,,這個(gè)是主要的過(guò)敏原成分),。154.17mcg/vial 表示 Der P1 的含量是:154.17ug/瓶,mcg, microgram 微克的縮寫,。
2)干重(Dry Weight): 干重16.7mg, 是去除水分后,,瓶子里粉末的含量。
3)總蛋白(Protein) :蛋白含量4.43mg,, 是指:過(guò)敏原提取物的總蛋白含量,。
4)內(nèi)毒素含量(Endotoxin):內(nèi)毒素水平。塵螨有一款低內(nèi)毒含量(做過(guò)內(nèi)毒素處理),,貨號(hào)為:XPB91D3A2.5/ XPB91D3A25(之前XPB70D3A2.5/ XPB70D3A25已停產(chǎn)),,要比未做過(guò)內(nèi)毒素處理的XPB82D3A2.5/ XPB82D3A25內(nèi)毒素含量相對(duì)低很多(并不是不含內(nèi)毒素)。
低內(nèi)毒素的一般用于做細(xì)胞實(shí)驗(yàn),,但由于凍干過(guò)程中無(wú)法保證無(wú)菌,,如果做細(xì)胞實(shí)驗(yàn),請(qǐng)做過(guò)濾除菌(0.22 um ),。
注意:
1)塵螨是提取物,,提取物是混合物,不是純蛋白,。由于工藝和每批過(guò)敏原原料差異,,因此每個(gè)批次含量(參數(shù))都不同。如果對(duì)含量有要求,,特別是之前用過(guò)別的批次的,,沒(méi)法保證和之前批次一致,請(qǐng)核對(duì)收到貨的COA,,確認(rèn)符合您的要求再開(kāi)瓶,。
2)過(guò)敏原提取物是混合物,不能作為標(biāo)準(zhǔn)品,,如ELISA實(shí)驗(yàn)中的標(biāo)準(zhǔn)品,。
3)參考文獻(xiàn)中用過(guò)Greer 產(chǎn)品的,都沒(méi)有具體的是參照哪個(gè)參數(shù),?而且不同文獻(xiàn)用量差別也很大,,因此沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)的方案推薦??蛻粜枰鶕?jù)自己的實(shí)驗(yàn)摸索最佳的實(shí)驗(yàn)條件,。
如果以純過(guò)敏原(Der P1)的含量為基準(zhǔn),,成本太高。
如果以:干重(Dry Weight)的含量為基準(zhǔn),,實(shí)際其中的過(guò)敏原的比例太低,,不足以致敏。
根據(jù)客戶實(shí)際使用經(jīng)驗(yàn),,客戶驗(yàn)證過(guò)參照Protein 含量做是可以的,,因此我們一般推薦客戶以“蛋白含量 Protein”為基準(zhǔn),具體實(shí)驗(yàn)條件客戶需要自己摸索,。
關(guān)于稀釋,、保存。
1) 過(guò)敏原提取物均為干粉包裝,,不是液體包裝,。規(guī)格里的2.5ml 或25ml 指的是瓶裝規(guī)格。
客戶可以根據(jù)實(shí)際工作濃度,,用蒸餾水稀釋到儲(chǔ)液濃度,,比如:蛋白含量是:4.43mg,用:2.5ml 蒸餾水稀釋后,,濃度就是:4.43mg/2.5ml=1.772mg/ml,。
2) 塵螨干粉效期是10年,干粉室溫或4℃保存,。稀釋后分裝-20℃凍存(保證濃度在:0.1mg/ml以上),,效期1年。
注意事項(xiàng):
1. 蛋白含量不是重量,, 不要用天平去稱量,,這個(gè)蛋白含量的測(cè)定COA里有說(shuō)明,是Bradford法測(cè)定的,,請(qǐng)不要用天平去稱量,。如果用天平去稱量了,會(huì)導(dǎo)致無(wú)法定量,,請(qǐng)不要做此操作,。例如:您要用50ug 的量,那您可以根據(jù)您稀釋后的濃度(比如:1.772mg/ml),,可以根據(jù)這個(gè)算出您取多少體積的量就可以了,。這樣是可以準(zhǔn)確定量的。
2. 玻璃瓶易碎,,請(qǐng)不要置于-80℃保存,。
結(jié)果示例:
產(chǎn)品引用文獻(xiàn):
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