T4 DNA連接酶的作用原理

來源：上海恪承生物科技有限公司 2024年02月23日 08:49

　　T4 DNA連接酶可以催化粘端或平端雙鏈DNA或RNA中毗鄰的5’磷酸基團(tuán)和3’ 羥基末端之間形成磷酸二酯鍵。酶還可以修復(fù)雙鏈DNA，RNA或DNA/RNA復(fù)合體中的單鏈切口,，連接DNA的粘性和平末端,，但是該酶對單鏈核酸無酶活性,。

　　T4 DNA連接酶的作用過程可以分為3個(gè)步驟：

　　1,、連接酶的賴氨酸活性位點(diǎn)對ATP的α-磷酸基團(tuán)親核攻擊，釋放PPi,，并生成T4 DNA連接酶-AMP中間體,。

　　2、DNA鏈的5' -磷酸基團(tuán)攻擊連接酶-AMP中間體,，AMP被轉(zhuǎn)移到DNA鏈的5' -磷酸基團(tuán)上,，生成DNA-腺苷酸中間體。

　　3,、DNA鏈的3' -羥基進(jìn)攻5' -磷酸基團(tuán),，形成磷酸二酯鍵，釋放AMP,。

　　使用注意事項(xiàng)：

　　1,、使用前應(yīng)在室溫放置至融化或用手掌溫度輔助融化,，然后置于冰上。不要加熱融化以免ATP降解,。

　　2、T4 DNA Ligase對熱敏感,，容易失活,。使用時(shí)請放置冰上，用后立即置冰箱中冷凍保存,。

　　3,、如需在接反應(yīng)后滅活T4 DNA Ligase，可于65℃孵育10min即可,。

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