BCA蛋白質(zhì)定量試劑盒實(shí)驗(yàn)原理：

堿性條件下,，蛋白質(zhì)分子中的肽鍵結(jié)構(gòu)能與Cu2+結(jié)合生成紫色絡(luò)合物，同時(shí)將Cu2+還原為Cu+,。BCA試劑可靈敏特異的與Cu+結(jié)合,，形成穩(wěn)定的有顏色的絡(luò)合物，562nm處有zui高的吸收值,，可在540-595nm測(cè)定其吸收值,，顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比,，即可計(jì)算待測(cè)蛋白的濃度,。

BCA蛋白質(zhì)定量試劑盒簡(jiǎn)介：

對(duì)不同種類的蛋白質(zhì)檢測(cè)的變異系數(shù)非常小，快速靈敏,，穩(wěn)定可靠,，測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中化學(xué)物質(zhì)的影響,，可以兼容樣品中高達(dá)5%的SDS,，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80,。而且在20-2000μg / mL濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系,。

BCA蛋白質(zhì)定量試劑盒使用說明：

1. 根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B（50:1）配制適量BCA工作液,，充分混勻,。BCA工作液室溫下24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2. *溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)品,，取C液10微升稀釋至100微升,，使終濃度為0.5mg/mL。原則上,，蛋白樣品在什么溶液中,，標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用什么溶液稀釋。但我們強(qiáng)烈建議使用三蒸水稀釋標(biāo)準(zhǔn)品及樣品。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度范圍應(yīng)在20-2000μg / mL之間,。建議使用倍比稀釋法,；建議取4~6個(gè)不同的濃度做標(biāo)準(zhǔn)曲線；建議每個(gè)濃度做2~3個(gè)復(fù)孔,。

4. 蛋白樣品的稀釋：將待測(cè)蛋白樣品稀釋到標(biāo)準(zhǔn)曲線所能檢測(cè)的范圍內(nèi),。在eppendorf管中對(duì)待測(cè)蛋白進(jìn)行稀釋，混勻,?？捎萌芙獾鞍椎囊后w進(jìn)行稀釋，但我們建議使用三蒸水稀釋標(biāo)準(zhǔn)品,。

5. 在96孔板各孔中加入200μL BCA工作液,，再在每孔中分別加入已稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品和蛋白樣品各20μL，建議標(biāo)準(zhǔn)品做2~3個(gè)復(fù)孔,。37℃放置30分鐘,。

6. 測(cè)定A562nm處的吸光度值，540-595nm之間的波長(zhǎng)也可接受,。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出蛋白濃度,。