熒光顯微鏡的結構和主要部件

　熒光顯微鏡是免疫熒光細胞化學的基本工具,。它是由光源、濾板系統(tǒng)和光學系統(tǒng)等主要部件組成,。是利用一定波長的光激發(fā)標本發(fā)射熒光,，通過物鏡和目鏡系統(tǒng)放大以觀察標本的熒光圖像,。
　　熒光顯微鏡的結構和主要部件
　　（一）光源
　　現(xiàn)在多采用200W的超高壓汞燈作光源，它是用石英玻璃制作,，中間呈球形,，內(nèi)充一定數(shù)量的汞，工作時由兩個電極間放電,，引起水銀蒸發(fā),，球內(nèi)氣壓迅速升高，當水銀*蒸發(fā)時,，可達50～70個標準大氣壓力,，這一過程一般約需5～15min。超高壓汞燈的發(fā)光是電極間放電使水銀分子不斷解離和還原過程中發(fā)射光量子的結果,。它發(fā)射很強的紫外和藍紫光,，足以激發(fā)各類熒光物質，因此,，為熒光顯微鏡普遍采用,。
　　超高壓汞燈也散發(fā)大量熱能。因此,，燈室必須有良好的散熱條件,，工作環(huán)境溫度不宜太高。
　　新型超高壓汞燈在使用初期不需高電壓即可引燃,，使用一些時間后,，則需要高壓啟動（約為15000V），啟動后,，維持工作電壓一般為50～60V,，工作電流約4A左右。200W超高壓汞燈的平均壽命,，在每次使用2h的情況下約為200h,，開動一次工作時間愈短，則壽命愈短,，如開一次只工作20min,，則壽命降低50%。因此,，使用時盡量減少啟動次數(shù),。燈泡在使用過程中，其光效是逐漸降低的,。燈熄滅后要等待冷卻才能重新啟動,。點燃燈泡后不可立即關閉，以免水銀蒸發(fā)不*而損壞電極，一般需要等15min,。由于超高壓汞燈壓力很高,，紫外線強烈，因此燈泡必須置燈室中方可點燃,，以免傷害眼睛和發(fā)生爆炸時造成操作,。
　　超高壓汞燈（100W或200W）光源的電路和包括變壓、鎮(zhèn)流,、啟動幾個部分,。在燈室上有調(diào)節(jié)燈泡發(fā)光中心的系統(tǒng)，燈泡球部后面安裝有鍍鋁的凹面反射鏡,，前面安裝有集光透鏡,。
　　國產(chǎn)超高壓汞燈GCQ-200型性能良好，可以代替HBO-200等型的進口燈泡,，平均壽命在200h以上,，價格也比較低。
　　我國研制的一種簡易輕便型高色溫溴鎢熒光光源裝置,，體積小，重量輕,，功率小,，交、直流兩用（自帶直流電源）,，易于攜帶,，使用方便，已推廣應用,。
　　（二）濾色系統(tǒng)
　　濾色系統(tǒng)是熒光顯微鏡的重要部位,，由激發(fā)濾板和壓制濾板組成。濾板型號,，各廠家名稱常不統(tǒng)一,。濾板一般都以基本色調(diào)命名，前面字母代表色調(diào),，后面字母代表玻璃,，數(shù)字代表型號特點。奧林巴斯顯微鏡
　　（三）物鏡
　　各種物鏡均可應用,，但用消色差的物鏡,，因其自體熒光極微且透光性能（波長范圍）適合于熒光。由于圖像在顯微鏡視野中的熒光亮度與物鏡鏡口率的平方成正比,，而與其放大倍數(shù)成反比,，所以為了提高熒光圖像的亮度，應使用鏡口率大的物鏡。尤其在高倍放大時其影響非常明顯,。因此對熒光不夠強的標本,，應使用鏡口率大的物鏡，配合以盡可能低的目鏡（4×,5×,，6.3×等）,。
　　（四）反光鏡
　　反光鏡的反光層一般是鍍鋁的，因為鋁對紫外光和可見光的藍紫區(qū)吸收少,，反射達90%以上,，而銀的反射只有70%；一般使用平面反光鏡,。
　　（五）聚光鏡
　　專為熒光顯微鏡設計制作的聚光器是用石英玻璃或其他透紫外光的玻璃制成,。分明視野聚光器的暗視野聚光器兩種。還有相差熒光聚光器,。
　　（六）落射光裝置
　　新型的落射光裝置是從光源來的光射到干涉分光濾鏡后,，波長短的部分（紫外和紫藍）由于濾鏡上鍍膜的性質而反射，當濾鏡對向光源呈45,。傾斜時,，則垂直射向物鏡，經(jīng)物鏡射向標本,，使標本受到激發(fā),，這時物鏡直接起聚光器的作用。同時,，濾長長的部分（綠,、黃、紅等）,，對濾鏡是可透的,，因此，不向物鏡方向反射,，濾鏡起了激發(fā)濾板作用,，由于標本的熒光處在可見光長波區(qū)，可透過濾鏡而到達目鏡觀察,，熒光圖像的亮度隨著放大倍數(shù)增大而提高,，在高放大時比透射光源強。它除具有透射式光源的功能外,，更適用于不透明及半透明標本,，如厚片、濾膜,、菌落,、組織培養(yǎng)標本等的直接觀察。近年研制的新型熒光顯微鏡多采用落射光裝置，稱之為落射熒光顯微鏡,。