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熒光分光光度計(jì)是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜,、發(fā)射光譜以及熒光強(qiáng)度,、量子產(chǎn)率、熒光壽命,、熒光偏振等許多物理參數(shù),，從各個(gè)角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況,。通過對(duì)這些參數(shù)的測定， 不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化,， 從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系,。熒光分光光度計(jì)的激發(fā)波長掃描范圍一般是190~650nm，發(fā)射波長掃描范圍是200~800nm,?？捎糜谝后w、固體樣品(如凝膠條)的光譜掃描,。
熒光分光光度計(jì)的基本原理：
由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍(lán)紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中,，激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光，熒光經(jīng)過濾過和反射后,，被光電倍增管所接受,，然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來。物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài), 這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,在返回基態(tài)的過程中將一部分的能量又以光的形式放出,，從而產(chǎn)生熒光,。
不同物質(zhì)由于分子結(jié)構(gòu)的不同,其激發(fā)態(tài)能級(jí)的分布具有各自不同的特征，這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜,，因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來定性地進(jìn)行物質(zhì)的鑒定,。
熒光分光光度計(jì)的工作原理涉及光源、樣品室,、激發(fā)單色器和發(fā)射單色器的組合,。光源通常為高壓汞蒸氣燈或氙弧燈，它們能夠發(fā)射出強(qiáng)度較大的連續(xù)光譜,。樣品室則用來放置被測樣品,，可以是液體或固體(如凝膠條)。激發(fā)單色器負(fù)責(zé)篩選特定的激發(fā)光譜,，而發(fā)射單色器則用于篩選特定的發(fā)射光譜,。最后，檢測器將接收到的光信號(hào)轉(zhuǎn)換為電信號(hào),，以便進(jìn)一步的處理和分析,。
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