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超微量分光光度計(jì)與蛋白質(zhì)檢測那點(diǎn)事

來源:上海寶予德科學(xué)儀器有限公司   2024年01月29日 09:43  

超微量分光光度計(jì)是實(shí)驗(yàn)室里常見儀器,,常被用于檢測核酸的濃度和純度,,那么它在蛋白質(zhì)檢測上的應(yīng)用呢,?


常用的蛋白質(zhì)吸收波長為280nm,,其他常見的顯色法蛋白質(zhì)檢測所需要的波長為562nm,、595nm,、650nm等,。Microdrop系列超微量分光光度計(jì)的檢測波長范圍覆蓋185-910nm,可以覆蓋大部分實(shí)驗(yàn)所需情況,,并且內(nèi)置了直接檢測,、BCA法、Bradford,、Lowry等共6種可選計(jì)算方法,,其基座模式能夠檢測0.5-2μL的樣本,大大節(jié)約了樣本的消耗,。

圖片2.png

但是在實(shí)際使用中,,不時(shí)會有一些小伙伴發(fā)現(xiàn),,檢測出來的結(jié)果不準(zhǔn)確、不穩(wěn)定,,這是為什么呢,?


很大的一個原因是——樣本量。雖然基座檢測時(shí)樣本的量不是特別關(guān)鍵,,但是必須保證兩根光纖之間形成完整的液柱,,這樣才能保證兩根光纖之間形成樣本液柱,使得我們的光信號能夠完整通過樣本并回流到檢測器中,。

要使樣本液滴能夠順利地被拉出液柱,,需要保證液滴具有足夠大的表面張力,決定液滴表面張力的主要因素是溶液中水分子的氫鍵結(jié)合力,。通常情況下,,溶液中所有的溶質(zhì)(蛋白,DNA,,RNA,鹽離子,,去垢劑分子)都會表面張力產(chǎn)生影響,,總的來說純化獲得的蛋白質(zhì)溶液通常表面張力會較低

因此,,我們建議,,在進(jìn)行純蛋白、Bradford,,BCA,,Lowry或者蛋白Pierce 660nm試驗(yàn)時(shí),適當(dāng)增加上樣量至2μL,,能夠有效幫助液柱形成,,提高最終檢測結(jié)果的準(zhǔn)確和精確性。


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