實驗室酶標板的使用注意事項
根據(jù)不同的分類標準,,酶標板有著不同的分類。
一、根據(jù)孔數(shù),,可分為96孔,、48孔,,其中96孔是現(xiàn)在常用的,,因為酶標板就是配合酶標儀用,現(xiàn)在的酶標儀做出來的最多的是96孔,,所以客戶在購買時也是要96孔板,,廠家也為了適應市場基本上做出來的就是96孔的。
二,、根據(jù)其底部的不同,,又分為平底的,U型底,、V型底,。平底的折射率低,適于在酶標儀檢測;U型底的酶標板折射率較高,,方便加樣,、吸樣、混勻等操作,,可以不用放在酶標儀上,,直接通過目測觀察顏色變化情況,從而判定有無相應的免疫反應,。V底的酶標板可以精確的吸取樣品,。
三、根據(jù)酶標板與蛋白和其它分子結(jié)合能力的不同,,又分為高結(jié)合力,,中結(jié)合力和氨基化的。
1) 高結(jié)合力
此種酶標板,,表面經(jīng)處理后,,其蛋白結(jié)合能力大大增強,,可達300~400ng IgG/cm2,主要結(jié)合的蛋白分子量>10kD,。使用該類酶標板可提高敏感性,,并可相對減少包被蛋白的濃度和用量,不足之處為較易產(chǎn)生非特異性反應,。抗原或抗體包被后,,以非離子去污劑無法有效地封閉未結(jié)合蛋白的部位,,需使用蛋白作為封閉劑。
2) 中結(jié)合力
此類酶標板經(jīng)表面疏水鍵被動與蛋白結(jié)合,,適合作為分子量>20kD的大分子蛋白的固相載體,,其蛋白結(jié)合能力為200~300ng IgG/cm2。由于該類酶標板所具有的僅與大分子結(jié)合的特性,,適用于作為未純化抗體或抗原的固相載體,,可降低潛在的非特異性交叉反應。該類板可以惰性蛋白或非離子去污劑作為封閉液,。
3)氨基化
這種酶標板經(jīng)表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基,,其疏水鍵由親水鍵取代。該類酶標板適合作為小分子蛋白的固相載體,。使用合適的緩沖液和pH值,,其表面可通過離子鍵與帶負電荷的小分子結(jié)合。由于其表面的親水特性和可通過其它交聯(lián)劑共價結(jié)合的能力,,可用于固定溶于Triton-100,、Tween 20等去污劑的蛋白分子。該類板的缺陷為由于降低了疏水性,,一部分蛋白分子無法結(jié)合;此外,,其表面需有效地封閉。由于親水和共價的表面特性,,使用的封閉液必須能夠與非反應性氨基基團和所選擇的交聯(lián)劑中任何功能基團發(fā)生作用,。
四、另外根據(jù)顏色又分為透明,、黑色,、白色。
透明的是常用的,,用于最一般的酶聯(lián)免疫實驗,。相對于透明的的板子,還有用于發(fā)光檢測用的不透明的板子,,一般有黑色和白色兩種,。黑色的酶標板自身會有光吸收,,所以它的信號相對于白色的板子要低很多,因此一般用于檢測較強的光,,如熒光檢測,。而白色的酶標板就用于較弱的光檢測,常用于一般的化學發(fā)光,。另外黑色的酶標板還可以消弱非特異反應帶來的問題,。有些客戶會問,用一般的酶標板可不可以進行發(fā)光檢測,,回答是不可以的,,因為一般從化學發(fā)光反應中發(fā)射出的光是各向同性的,也就是說各個方向上同等發(fā)射出來的,。如果用透明的板子,,光不僅會從垂直方向發(fā)散,還從水平方向發(fā)散出來,。很容易的就會通過各個孔之間的間隙和孔壁,。這樣的話,光較強時相鄰孔之間的影響就會很大,,因此不能用透明的酶標板來進行化學發(fā)光實驗,。
五、一般酶標板大多是可以拆卸的,,也就是單條可以拆下來,,也有固定的板子。單條可拆的的板子其實可以省下許多錢,,因為這樣的話,,當你想用新的酶標板時,可以將酶標板條拆下來,,買些酶標板條就可以了,,只是要考慮要配相同的型號即可。另外,,可拆的酶標板可以用來做體外檢測,,方便拆卸。
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