貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞如何傳代,？

來(lái)源：深圳市安培生物科技有限公司 2024年01月16日 16:09

1.貼壁細(xì)胞如何進(jìn)行傳代？

去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基,，T25瓶加3-4 ml PBS洗1-2次;棄PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA (1X)消化液消化細(xì)胞,，顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞變圓，細(xì)胞間隙明顯,，部分細(xì)胞剛開(kāi)始脫離瓶壁，加4 ml左右（血清）細(xì)胞培養(yǎng)液混勻終止消化,，將細(xì)胞小心吹打下來(lái)，1000 rpm/min室溫離心5min;棄上清,，細(xì)胞沉淀用（血清）細(xì)胞培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶(視細(xì)胞密度而定1:2-1:3,，1:3-1:6,，1:6-1:8)，每T25瓶補(bǔ)足培養(yǎng)基至5-6 ml,，37℃,、5%CO2孵箱培養(yǎng)。

2.懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何傳代處理？

一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中，稀釋細(xì)胞濃度即可,，若培養(yǎng)液太多時(shí)，將細(xì)胞懸液移入離心管中,，1000 rpm/min 室溫離心5 min。棄上清,，細(xì)胞沉淀用（血清）細(xì)胞培養(yǎng)液重懸,，按要求分瓶(視細(xì)胞密度而定1:4-1:8)，每T25瓶加培養(yǎng)液至4-5 ml,，37℃,、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細(xì)胞趨于成團(tuán)生長(zhǎng),，此時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，當(dāng)補(bǔ)液時(shí),，需避免反復(fù)吹打,。

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