制備步驟:

將組織在恒溫冷凍機(jī)里面切片,。

冷凍腔內(nèi)的溫度一般設(shè)置為-18℃至-25℃，根據(jù)不同組織調(diào)節(jié)不同腔溫,，平時(shí)應(yīng)將冷凍頭放置在冷凍臺(tái)上。

冷凍切片機(jī)應(yīng)長(zhǎng)期處在冷凍恒溫狀態(tài)。

1,、當(dāng)冰凍組織提取好之后,，在冷凍頭上放少量的OCT或羧田基纖維素(可用普通膠水代替)，放上組織,，速凍,。

2、待組織凍結(jié)后,，將冷凍頭裝刀切片機(jī)上。

3,、粗切,，修出切面細(xì)切幾張,，用毛筆刷去刀上組織片。

4,、放下抗卷板,，開始切片,，切片速度一般為5-6微米，切出的片子用載玻片貼附后立即放入甲醇冰醋/酸液(97ml甲醇+3ml冰醋/酸)中固定,，固定時(shí)間為10-20秒。

注意事項(xiàng):

1,、速凍是冰凍切片的關(guān)鍵，因?yàn)橹挥兴賰霾拍軠p少組織內(nèi)的冰晶,，辦法就是將速凍頭迅速壓在組織上，切好后就可以凍片,，特別適用于較脆的組織,。

2,、固定切片后應(yīng)立即放入甲醇冰醋/酸中固定,，不能等切片干后再固定,，后者容易造成細(xì)胞退變。固定液有很多種,，甲醇作用快、收縮小,、染色較清晰,，是冰凍切片固定液，而每97ml加入冰酸醋3ml,，會(huì)減少某些膠質(zhì),、鈣質(zhì)較多的組織不容易掉片,。

3,、包埋劑可用普通膠水代替，但要加入適量的水(膠水與水的比例大約在2:1),。

太稀了容易損傷切片刀，太稠了黏在刀上不容易洗掉,，影響切片的質(zhì)量。

4,、冰凍用切片刀不僅要磨得快，而且要磨得直,，否則切出來的片子就會(huì)不平整,，不能進(jìn)入抗卷板(最好使用一次性刀片)。

5,、如組織發(fā)脆,，可以等幾分鐘后再切，也可用手在組織上稍微加溫;如果用手去摸組織塊,，最好戴手套,，或用玻片間的紙夾在手與組織之間,，以防感染,。

6、冷凍室的室溫冬天一般設(shè)置在-19℃左右,，夏天設(shè)置在-22℃左右。

不同的組織有不同的溫度要求,，如肝臟,、甲狀腺組織溫度應(yīng)設(shè)置在-15℃左右，脂肪組織一般設(shè)置在-35℃以下,。

7,、冷凍切片機(jī)應(yīng)長(zhǎng)期處于恒溫冷凍狀態(tài),，經(jīng)常的開關(guān)電源容易造成設(shè)備損壞,。