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制備單克隆抗體時(shí)有哪些具體步驟

來(lái)源:上海一研生物科技有限公司   2023年12月19日 11:12  
一抗可用于檢測(cè)糖尿病,、癌癥、阿爾茨海默病和帕金森病的生物標(biāo)志物,。二抗則主要用于檢測(cè)和純化抗原蛋白,。二抗在標(biāo)記和檢測(cè)方面比較靈敏和靈活。所以,,它們?cè)诹魇郊?xì)胞術(shù),、蛋白質(zhì)印跡和細(xì)胞成像等一系列應(yīng)用中用于一抗的比色、化學(xué)發(fā)光和熒光檢測(cè),。二抗類(lèi)型的選擇基于一抗的類(lèi)別:免疫球蛋白IgG或IgM,、標(biāo)簽類(lèi)型和來(lái)源宿主。
制備單克隆抗體時(shí)有哪些具體步驟:
一,、免疫動(dòng)物選擇
根據(jù)需要產(chǎn)生目標(biāo)抗原的免疫反應(yīng),,選擇合適的免疫動(dòng)物。例如,,小鼠是免疫動(dòng)物之一,,因其易于操作且在免疫應(yīng)答方面較為強(qiáng)大。
二,、抗原免疫
將目標(biāo)抗原注射到免疫動(dòng)物體內(nèi),,通常需要多次免疫以激發(fā)免疫反應(yīng)??梢赃x擇不同的免疫路線,,如皮下、腹腔,、靜脈等,。
三、細(xì)胞融合
從免疫動(dòng)物獲得脾細(xì)胞或淋巴細(xì)胞,,與骨髓瘤細(xì)胞或其他癌細(xì)胞(如SP2/0,、NS0等)融合,形成雜交瘤細(xì)胞,。融合細(xì)胞通常使用(PEG)或電穿孔等方法促進(jìn)細(xì)胞融合,。
四、雜交瘤細(xì)胞篩選
對(duì)融合細(xì)胞進(jìn)行篩選,,一般使用HAT選擇性培養(yǎng)基,,通過(guò)對(duì)非雜交瘤細(xì)胞和單克隆雜交瘤細(xì)胞的抗代選擇,,篩選出產(chǎn)生目標(biāo)抗體的單克隆雜交瘤細(xì)胞。
五,、單克隆抗體生產(chǎn)
從篩選出的單克隆雜交瘤細(xì)胞中獲取單一細(xì)胞系,,并進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)和產(chǎn)生抗體。一般可采用體外或體內(nèi)方式,。
 

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