siRNA轉染的常見問題解答

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如何優(yōu)化siRNA轉染？轉染少量的siRNA為何很重要,？在siRNA轉染過程中為何應當避免細胞毒性,？本文收錄了與siRNA轉染相關的常見問題，并附上專家的解答,，希望能對您的實驗有幫助,。

Q：我該如何優(yōu)化siRNA轉染？

A：在實驗室中建立RNAi和研究每一種新的細胞系時,，應當優(yōu)化siRNA的轉染,。HiPerFect Transfection Reagent Handbook中包含優(yōu)化的有用信息（www.qiagen.com/HB/HiPerFect）。在優(yōu)化實驗中,，轉染效率可通過陽性對照（如AllStars Cell Death Control siRNA）的轉染來監(jiān)控,。應當優(yōu)化的轉染因素包括：
試劑和siRNA的量

轉染時的細胞匯合度

分析前細胞和復合物的孵育時間

Q：轉染少量的siRNA為何很重要？

A：高濃度的siRNA轉染可能產(chǎn)生脫靶效應,，即siRNA影響了部分同源或非同源基因的表達,。研究表明，可能會對RNAi實驗產(chǎn)生誤導結果的脫靶效應可通過降低siRNA濃度而在很大程度上避免（1,2）,。HiPerFect Transfection Reagent有助于siRNA的吸收,，實現(xiàn)了低濃度下的基因沉默,，而不損害knockdown的效率。

Q：在siRNA轉染過程中為何應當避免細胞毒性,？

A：siRNA導入所引起的細胞毒性干擾了RNAi后的數(shù)據(jù)分析,，因為表型分析不再可靠。影響數(shù)據(jù)分析的因素包括轉染試劑所引起的表型改變,，壓力所引起的基因表達改變,，以及不應當用于分析的死細胞的存在。

HiPerFect Transfection Reagent對細胞無毒性,，不會引起液泡形成（這標志著細胞進程的破壞）,。詳細的細胞周期和細胞形態(tài)學分析顯示mock轉染的細胞（只有HiPerFect Transfection Reagent）和未轉染的細胞之間無差異。

Q：順式轉染和反式轉染之間有什么差別,？

A：在反式轉染的步驟中,，siRNA先加在平板的孔中，然后才是轉染試劑,。在復合物形成之后,，加入細胞。順式轉染則相反,，先在孔中加入細胞,，然后才是復合物。反式轉染使用廣泛,，特別對于高通量實驗,，因為它容易自動化，轉染前siRNA可儲存在孔中,，且使用了較少的材料,，因為不需要在一塊單獨的板上開展siRNA-轉染試劑復合物的形成。

順式轉染                                       反式轉染
第1步 細胞                                   第1步 核酸
第2步 轉染復合物                       第2步 HiPerFect Reagent
                                                        第3步 細胞

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