前言

拉曼光譜技術(shù)是一種分析物質(zhì)結(jié)構(gòu)和成分的非侵入性技術(shù),。通過照射樣品并測量其散射光的頻移,，可以獲得物質(zhì)的拉曼光譜圖,。這種技術(shù)可以用于化學(xué)品、生物樣品,、納米材料等的快速分析。它具有高靈敏度,、無需樣品處理等優(yōu)點,，可廣泛應(yīng)用于材料科學(xué)、生命科學(xué),、環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域,。

拉曼光譜的應(yīng)用十分廣泛，但是同時拉曼檢測還會受到許多的限制,。當(dāng)物質(zhì)收到激發(fā)光照射時,，除了待檢測的拉曼散光光外，還有比拉曼光強許多的銳利散射光,，同時還有可能存在熒光,。

熒光產(chǎn)生機制

拉曼光譜技術(shù)背后的物理機制是拉曼散射。當(dāng)用一定頻率的激發(fā)光照射到樣品時,，一部分入射光子與樣品分子之間發(fā)生彈性碰撞,，發(fā)出彈性散射光，這種散射沒有能量交換,，稱為瑞利散射,；有一部分入射光子和樣品分子發(fā)生了非彈性碰撞，產(chǎn)生了能量的轉(zhuǎn)移,，這種散射稱為拉曼散射,。

圖1 拉曼散射以及瑞利散射能級圖

除了上述發(fā)生的散射外，物質(zhì)收到激光照射并吸收某些特征頻率的光子后,，可以由基態(tài)躍遷至第一電子激發(fā)態(tài)或高電子激發(fā)態(tài)的不同振轉(zhuǎn)能級,，處于電子激發(fā)態(tài)的分子通過熱振動等弛豫過程降至第一電子激發(fā)態(tài)的zui低能級，然后再由該zui低能級向基態(tài)的各個振轉(zhuǎn)能級躍遷并發(fā)出熒光,。

圖2 熒光散射能級圖

總體來說,，拉曼散射發(fā)生的概率很小，所以拉曼光強度遠小于瑞利散射光和熒光的強度,。瑞利散射一般比拉曼散射強上千倍,，而熒光可達拉曼光強度的十的六次方到八次方倍。但由于瑞利散射光的波長和激發(fā)光波長相同,，可以通過窄帶帶組濾光片、長通濾光片或多級單色儀裝置進行濾除,。但是熒光光譜范圍很寬,，通常是和拉曼光譜重疊在儀器，不能通過濾光片進行抑制,，熒光的存在會淹沒拉曼信號,，導(dǎo)致拉曼光譜無法檢測,。

抑制熒光的方法

1.熒光淬滅劑

熒光猝滅劑是較有效的方法之一，該方法需要在樣品中添加一定的熒光猝滅劑,，利用猝滅劑分子與樣品分子之間物理化學(xué)反應(yīng)來降低樣品分子的熒光發(fā)射強度,，從而達到抑制熒光的目的。這種方法成本低,，操作簡便,，但是加入的猝滅劑可能會影響待測樣品的拉曼譜，因而應(yīng)用范圍受到較大的限制,。

2.紅外/紫外光激發(fā)法

由于近紅外波段的光子很少能被樣品分子吸收,，基態(tài)電子很難被激發(fā)，因此產(chǎn)生熒光的可能性較小,。但由于拉曼散射光的強度與波長的四次方成反比,，所以用這種方法得到的拉曼散射強度很弱。785nm激光能有效避免熒光的產(chǎn)生,，并且該波段的CCD量子效率比較高,，因此用785nm作為拉曼激發(fā)光源越來越受到研究人員的青睞。

紫外光激發(fā)方法是用小于250nm的激光激發(fā)樣品,，由于熒光的斯托克斯位移比拉曼位移大得多,，因此有熒光物質(zhì)存在，也能充分區(qū)別熒光和拉曼光,。紫外激發(fā)方法的一個較大局限性在于紫外光能量太高,，可能導(dǎo)致樣品分解。

總結(jié)

熒光對拉曼光譜有干擾作用,，往往會覆蓋或掩蓋拉曼散射信號,，降低了信號質(zhì)量。通過背景信號消除技術(shù),、時間解析等方法可以減少熒光對拉曼光譜的影響,，提高信號的檢測性能。同時,，選擇適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)波長和使用拉曼增強劑也可增強拉曼信號,，克服熒光干擾，實現(xiàn)準確的拉曼光譜分析,。