實驗干貨—ELISA實驗顯性淡,、靈敏度低是為什么?怎么解決?

　　Elisa 實驗以靈敏度較高,、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用,，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,，如不注意，有可能導致顯色不全,、花板等結果,。

　　酶聯(lián)免疫吸附實驗

　　一、顯色淡,，靈敏度偏低

　　可能原因及解決方法：

　　試劑盒從2~8℃冰箱取出后打開盒蓋,，于室溫平試劑盒未充分平衡衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫(約25℃)樣品一般選擇培養(yǎng)上清,、血清,、血漿。其他樣品

　　2,、樣品不適合做ELISA檢測形式可能不適合做ELISA檢測或者需要優(yōu)化檢測的條件(例如稀釋液的成分)

　　3,、酶標板在貯存或洗后拍干時過分防止板過于干燥，干燥

　　4,、包被抗體遭到破壞 操作溫和,，移液槍不能碰到孔底

　　5、樣本和抗體孵育條件不合適,，按照說明書條件,，建議孵育過程中全程振蕩孵育

　　6、洗滌浸泡時間過長,，按照說明書操作,，勿人為增加漫泡時間

　　7,、偶聯(lián)HRP試劑污染棄去試劑，重新配置

　　8,、錯誤的稀釋偶聯(lián)HRP試劑棄去試劑,，重新配置確定合適的孵育時間:人為判定-最高濃度的標準TMB底物孵育時間過短，因非人,。

　　9,、品出現(xiàn)深藍色;S4-5有淡藍色;機器判定620n為因素影響，需要優(yōu)化孵育時間m波長下測定OD值達到0.6-0.65

　　10,、樣本濃度過高或存在基質效應建議做不同稀釋倍數(shù),，確認樣本最佳稀釋倍數(shù)酶標儀濾光片設置有問題或者波

　　11、確認儀器設置及選擇正確的波長檢測長選擇不對不能使用細胞培養(yǎng)板,，建議使用ELISA專用高吸

　　12,、酶標板不適合做ELISA附力板子

　　二、出現(xiàn)白板,，陽性對照不顯色

　　可能原因及解決方法：

　　1,、顯色液變質更換新的顯色液

　　2、洗滌液配制有誤請按說明書所示稀釋倍數(shù)配制

　　3,、未加酶結合物而認為已加入注意不要漏加

　　4,、終止液誤作洗滌液稀釋或當?shù)孜镆菏褂妹看渭右呵熬鶓辞鍢撕炚埌凑照f明書所示配置說明書，注意

　　5,、標準品稀釋方法錯誤/或標準品有問題單位和稀釋倍數(shù),，建議使用同批次試劑盒，不能混用不

　　6,、不同試劑盒或不同批號的試劑混用,，同試劑盒或不同批號的試劑

　　三、不正常的標準曲線

　　可能原因及解決方法：

　　1,、錯誤的方法重懸標準品加入正確量的溶液重懸標準品,，重懸充分

　　2、標準品稀釋錯誤按照說明書要求稀釋標準品

　　3,、標準品污染用一次性的滅菌吸頭,，標準品貯存于2-8℃

　　4、錯誤的倍比稀釋步驟按照說明書倍比稀釋標準品TMB為底物和以OPD為底物的試劑盒均有使用,，

　　5,、波長選擇錯誤而前者比色波長為450nm，后者為492nm,。雙波長比色分析優(yōu)于單波長

　　6,、標準品混用不同批號試劑勿混用

　　7、試劑盒在運輸途中時間太盡量縮短運輸時間,，夏季應放冰塊降溫長,，溫度太高,，標準品失ELISA未終止而直接檢測4顯色需終止后檢測，否則會出現(xiàn)620nm比450nm讀

　　8,、50nm和620nm數(shù)高的現(xiàn)象,。

　　四、OD值超出正常范圍

　　可能原因及解決方法：

　　1,、錯誤的樣品或標準品的稀釋按照說明書稀釋

　　2,、偶聯(lián)抗體濃度過高按照說明書調整到最佳的濃度

　　3、TMB底物孵育時間過長調整到合適的孵育時間

　　4,、樣品或標準品污染避免污染

　　5,、錯誤的孵育時間或溫度按照說明書

　　6、孵育時未加蓋導致溶液揮發(fā)和污染 貼封片或加蓋

　　elisa試劑盒本生一直視質量控制為企業(yè)的生命,，追求企業(yè)競爭力的不斷提升,。公司在經營中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己,，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準,，以過硬的質量和優(yōu)良的服務來維護和拓展市場,，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,，是我們的發(fā)展目標,。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作,，共創(chuàng)美好的未來,。