1.比色計的概念

比色計與光度計的概念不同，比色計是一種化學(xué)分析儀器,。利用光線
分別透過標(biāo)準(zhǔn)溶液(或玻片)和試樣溶液而進行比較顏色強度的儀器。用于比色分析。一般分為目視比色計和光電比色計,，而光度計是屬于后者,。

2.比色計和光度計的比較

比色計是光度計中的一種,專門比色用. 光度計除比色外還可作其他應(yīng)用.

比色計特指可見光比色分析的檢測儀器；光度計可涵蓋紫外,；可見,；紅外多個譜區(qū)。

區(qū)別主要有兩點：1.單色器：比色計采用濾光片濾除其他的雜光,，光線的純度低,，精度差；分光光度計采用分光系統(tǒng)（光柵或菱鏡）獲取單色光,，光線的純度高,，精度好。2.比色計一般用于可見光,，只有幾塊濾光片,，使用范圍狹窄；分光光度計可在儀器工作波長范圍之內(nèi)任意選取所需波長

比色計簡單,，便宜,，測定方便,，就是結(jié)果精度不高，主要用于界限測定等方面,；
光度計精密,，貴重，測定結(jié)果精確,。
兩種設(shè)備適用范圍不一樣,，當(dāng)然比色計能做的光度計都能做，只是要看用在什么方面,，有沒有這個必要,。

3.比色計原理
比色計原理
當(dāng)單色光通過厚度相同，而濃度很小的溶液時,，根據(jù)朗伯—比爾定律,，光被溶液吸收的程度，稱為吸收度,，與溶液的濃度成正比,，與溶液的厚度成正比，即A=εCL,，式中：A為吸收度,，C為溶液的濃度，L為溶液的厚度,，ε為消光系數(shù),。
由朗伯—比爾定律得，當(dāng)一束單色光通過一溶液時,，由于溶液吸收一部分光能,，使光的強度減弱。若溶液的濃度（或厚度）不變,，則溶液的厚度（濃度）愈大,，光線強度的減弱也愈明顯。
用同樣的方法配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測溶液,，其濃度分別為C1和C2，對同類溶液ε相同,，當(dāng)厚度也相同時則：
A1=εC1L
A2=εC2L
C2=（A2/A1）*C1

式中A1,A2可由羅維朋比色計直接讀出,，C1為標(biāo)準(zhǔn)溶液的已知濃度，據(jù)此可算出待測溶液的濃度,。
朗伯—比爾定律
許多化學(xué)物質(zhì)的溶液具有顏色（無色的化合物也可以加顯色劑經(jīng)反應(yīng)生成有色物質(zhì)）,，當(dāng)有色溶液的溶度改變時，顏色的深淺也隨之改變,，濃度愈大,，顏色愈深,。因此，可以用比較溶液顏色深淺的方法來測定有色溶液的濃度,。這種方法叫做比色分析法,。
一、 朗伯—比爾定律
當(dāng)一束單色光通過有色溶液時,，入射光線的一部分被器皿反射回來,，一部分被溶液吸收，另一部分則透過溶液,，如圖所示,。它們之間有以下關(guān)系：
Io=Ia+Ir+It      1-1
式中：Io—入射光強度，Ia—吸收光強度,，Ir—反射光強度,，It—透過光強度
由于在實際測定時，所用的比色皿都是同質(zhì)料用規(guī)格的,。反射光的強度為一定值,，不會引起測量誤差，所以反射光的影響可以不加考慮,。則上式可簡化為：
Io=Ia+It        1-2
從式1-2可知：當(dāng)入射光強度Io為一定時,，被吸收光強度Ia愈大，則透過光強度It愈小,。也就是說：光強度的減弱僅與有色溶液對光線的吸收有關(guān),。
那么，溶液對光線的吸收與哪些因素有關(guān)呢,？實驗證明：溶液的濃度C愈大,，液層厚度L愈厚（即光線在溶液中所經(jīng)過的路程愈長），則溶液對光線吸收的愈多,。它們之間的關(guān)系有下式?jīng)Q定：
lg = KCL      1-3
這個公式就是朗伯—比爾（Lambert---Beer）定律,。
公式中的K稱為吸光系數(shù)，它表示有色溶液在單位濃度和單位厚度時的吸光度,。在入射光的波長,、溶液種類和溫度一定的條件下，K為定值,。吸光系數(shù)是有色化合物的重要特性之一,，在比色分析中有著重要的意義。K值愈大,，表示該物質(zhì)對光的吸收能力愈強,，濃度改變時引起吸光度的改變愈顯著，因此比色測定時靈敏度愈高。
朗伯-比爾定律即有色溶液對一定強度光的吸收程度,，與液層厚度和溶液中有色物質(zhì)濃度的乘積成正比,。其中朗伯定律說明吸收光與厚度間的關(guān)系；比爾定律說明吸收光與濃度間的關(guān)系,。
朗伯—比爾定律在光電比色計中的應(yīng)用
假定有兩種有色溶液,，其中一種是已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，另一種是待測溶液,。根據(jù)公式：
在標(biāo)準(zhǔn)溶液中：As=KsCsLs 1-4
在待測溶液中：Ax=kxCxLx 1-5
將式1-4除以式1-5可得：
= 1-6
如果上述兩種溶液的液層厚度相等,、溫度相同而且是同一種物質(zhì)的兩種不同濃度的溶液，測定時所選用的單色光的波長亦相同,，則有：
Ls=Lx,、Ks=Kx ，代入式1-6可得：
= 1-7
由此可見,，在上述條件下,，吸光度與濃度成正比。這一關(guān)系式就是光電比色計的設(shè)計依據(jù),，也是比色分析的基本計算公式之一,。式中標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度Cs為已知，As和Ax可用光電比色計測量出來,，則待測溶液的濃度Cx即可求出：
Cx = × Cs 1-8
由于在實際測定時,，標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測溶液都要加以稀釋，而且在報告結(jié)果時,，多以100毫升（或1000毫升）中的含量來表示,。因此，在實際計算時,，就需要在上式中乘上稀釋因數(shù),。
求待測溶液濃度的方法有：直接比較法（計算法）、因數(shù)法和標(biāo)準(zhǔn)曲線法三種,。這些方法在“生物化學(xué)及生物化學(xué)檢驗技術(shù)”課程中有介紹,。
波長的選擇：
由于有色溶液對光的吸收具有選擇性，因此進行比色測定時,，濾光片必須加以選擇,，否則靈敏度很低，導(dǎo)致測量結(jié)果不準(zhǔn)確,。選擇濾光的一般原則是：濾光片最大透過的光線應(yīng)該是溶液最大吸收的光線,。從顏色上看，濾光片的顏色與待測溶液的顏色應(yīng)為“互補色”,。
什么叫做互補色呢？凡是兩種顏色相加后能得到白色，則此兩種顏色就稱為“互補色”,，圖中直接相對的兩種顏色,，均為互補色。
為什么選擇濾光片時,，要使濾光片的顏色與待測溶液的顏色為互補色呢,？這是因為濾光片和有色溶液具有相似的透光特性，與它們本身顏色相同的色光,，能夠最大限度地透過,。而與它們本身顏色成互補的色光都能被最大地吸收。