背景介紹：

銅濃度檢測在藥物發(fā)現(xiàn)和環(huán)境監(jiān)測中得到廣泛應(yīng)用,。銅是人體必需的微量元素。銅蛋白酶在鐵和兒茶酚胺代謝,，在清除自由基,，血紅蛋白，彈性蛋白,，膠原等方面扮演著重要角色,。銅主要存在于肝臟中的銅藍(lán)蛋白中。銅含量過低會導(dǎo)致智力低下,、色素缺失,、貧血,、肌肉緊張癥,、骨質(zhì)壞血病等疾病。

銅離子檢測在腫瘤研究中的應(yīng)用：

歷史研究表明,，銅穩(wěn)態(tài)失調(diào)與多種腫瘤有關(guān),，如婦科腫瘤、結(jié)直腸癌等,，而癌癥患者血清銅水平的升高與癌癥分級和化療耐藥性有關(guān),，如果銅的濃度超過一定的閾值,，就會中毒，導(dǎo)致一種新細(xì)胞死亡形式,，稱為銅中毒,，這種方式也被視為癌癥治療的潛在方法。

2023年10月20日,，上海市第一人民醫(yī)院黃陳教授和范廣建教授團(tuán)隊在Nature Communications雜志上發(fā)表了題為“Lactylation of METTL16 promotes cuproptosis via m6A-modification on FDX1 mRNA in gastric cancer”的研究論文,。本研究揭示了METTL16調(diào)控胃癌細(xì)胞銅死亡的分子機(jī)制，闡明乳?；揎椉癿6A修飾在胃癌進(jìn)展中的重要意義,，為胃癌的治療提供新的靶標(biāo)和策略。

圖 運(yùn)用銅離子檢測試劑盒abs580140對48例胃癌患者的胃癌組織裂解物進(jìn)行了銅含量檢測

銅離子檢測試劑盒：

另需自備的材料：酶標(biāo)儀（可讀取605nm處的吸光度）,、蒸餾水、移液器與槍頭,、離心機(jī),、計時器等。

操作步驟（以組織樣本為例）：

1,、樣本處理：稱取1g組織,，與1mL Assay buffer在冰上勻漿，10000g 4℃離心10min,，取上清液至新離心管中,，冰上保存待檢測。

2,、試劑準(zhǔn)備：

標(biāo)準(zhǔn)品：用蒸餾水二倍連續(xù)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品,；

圖 標(biāo)準(zhǔn)品二倍連續(xù)稀釋示例

Masking Reagent：使用1mL蒸餾水溶解（現(xiàn)配現(xiàn)用）；
Dye Reagent：使用1mL Dye Reagent Diluent溶解Dye Reagent,，70℃加熱助溶（現(xiàn)配現(xiàn)用）,。

3、上樣：分別將140uL不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,、樣品加入相應(yīng)孔中,，另設(shè)置空白孔加入140uL蒸餾水；每孔分別加入40uL Reaction Buffer,，10uL Masking Reagent以及10uL Dye Reagent,，混合均勻，室溫孵育15min,。

4,、檢測與計算：使用酶標(biāo)儀測量605nm處的吸光度，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算樣本濃度,。

圖 標(biāo)曲示例

注意事項：

1）金屬螯合劑（如EDTA）會干擾此分析,，在樣品制備中應(yīng)避免使用,；
2）對于未知的樣品，建議多做幾個稀釋梯度進(jìn)行預(yù)實驗,，確保讀數(shù)在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi),；
3）試劑盒中的Dye Reagent需要現(xiàn)配現(xiàn)用，配好的溶液無法儲存,，可能影響顯色讀數(shù)進(jìn)而影響檢測,；如果樣本需要分批檢測，建議分批收樣儲存,，待樣本收齊后統(tǒng)一檢測,；
4）每次實驗必須重新檢測并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

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