三羥甲基氨基甲烷(Tris)是一種應(yīng)用非常廣泛的有機試劑。它及其衍生物被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)和分子生物學(xué)實驗中的緩沖液的制備,,可用于制作藥物,、有機合成、生物緩沖劑等,。其中在生化實驗中,,許多蛋白質(zhì)及核酸相關(guān)的實驗都需要用Tris作為生物緩沖劑。那么你知道該如何選擇緩沖溶液嗎,?讓我們一起來看看吧,!
TBS即Tris緩沖鹽水,是Tris-HCl緩沖鹽溶液,,為等滲鹽溶液加Tris-HCl緩沖液,。因為Tris堿的堿性較強,所以可以只用這一種緩沖體系配制pH范圍由酸性到堿性的大范圍pH值的緩沖液,;對生物化學(xué)過程干擾很小,,不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀,。
但是緩沖液的pH值受溶液濃度影響較大,,溫度效應(yīng)也大,而且易吸收空氣中的CO2,,所以配制的緩沖液要蓋嚴(yán)密封,,此緩沖液對某些pH電極發(fā)生一定的干擾作用,所以要使用與Tris溶液具有兼容性的電極,。
TBST緩沖液 TBST中含有Tris-HCl,,NaCl,,tween20這三種物質(zhì),是做Western Blotting中常用的一種洗膜緩沖液,。目的是洗掉非特異性吸附的蛋白質(zhì),,并且維持一個接近的天然環(huán)境。其中,,Tween是一種離子表面活性劑,,可加速抗體非特異性結(jié)合的分離。因為Western Blotting中所用的膜可以與蛋白質(zhì)結(jié)合,,孵育過程中,,抗體能夠與膜非特異性結(jié)合。為了防止以后曝光造成膠片背景太高,,在孵育抗體后,,混有Tween 20的TBS 能夠?qū)⒎翘禺愋越Y(jié)合的抗體洗掉,增加特異性,。
TE緩沖液 Tris鹽酸緩沖液中加入EDTA制成“TE緩沖液”,,TE緩沖液是弱堿性,對DNA的堿基有保護(hù)性,,因此,,DNA在TE中的穩(wěn)定性較好,不易被破壞完整性或產(chǎn)生開環(huán)及斷裂,,TE緩沖液被用于DNA的穩(wěn)定和儲存,。
將調(diào)節(jié)pH值的酸溶液換成乙酸,則獲得“TAE緩沖液”(Tris/Acetate/EDTA),,TAE是使用zui廣泛的緩沖系統(tǒng),。其特點是超螺旋在其中電泳時更符合實際相對分子質(zhì)量,且雙鏈線狀DNA在其中的遷移率也較快,,電泳大于13kb的片段時用TAE緩沖液將取得更好的分離效果,。此外,回收DNA片段時也易用TAE緩沖系統(tǒng)進(jìn)行電泳,。但是,,TAE的缺點是緩沖容量小,除非有循環(huán)裝置使兩極的緩沖液得到交換,,否則長時間電泳是不可選用的,。
TBE緩沖液 丙烯酰胺實驗以及瓊脂糖凝膠電泳將調(diào)節(jié)pH值的酸溶液換成硼酸則獲得“TBE緩沖液”(Tris/Borate/EDTA)。TBE Buffer是分子實驗中常用的緩沖液,,由Tris和硼酸,、EDTA組成,所以簡稱為TBE buffer。該緩沖液常用于聚電泳實驗中,。TBE Buffer為無色澄清液體,,可在室溫中儲存,25℃時的pH值為8.2~8.4,。在使用時要注意的是TBE Buffer中不能含有DNA水解酶和RNA水解酶的活性,。
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