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無血清培養(yǎng)基的選擇

來源:上海惠誠生物科技有限公司   2023年11月22日 12:49  

無血清培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng),,提供了更方便的純化和下游加工處理以及更穩(wěn)定的性能,。無血清培養(yǎng)基的選擇通常根據(jù):(1)細(xì)胞或產(chǎn)物特異性; (2)細(xì)胞系對無血清培養(yǎng)基的適應(yīng)性,。


1、細(xì)胞或產(chǎn)物特異性

如果使用無血清培養(yǎng)基是為了促進(jìn)一種特殊類型細(xì)胞的生長,,那么這種選擇性是由培養(yǎng)基的選擇性決定的,。例如,MCDB 153用于培養(yǎng)表皮角質(zhì)細(xì)胞,,LHC-9用于培養(yǎng)支氣管上皮細(xì)胞,,HITES用于培養(yǎng)小細(xì)胞肺癌細(xì)胞、MCDB130用于培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞等,。

如果只是為了不用血清培養(yǎng)連續(xù)細(xì)胞系,,如CHO細(xì)胞或雜交瘤細(xì)胞,從而減少細(xì)胞產(chǎn)物中含有濾過性毒素或血清蛋白的可能,,那么這種選擇的范圍就會(huì)更廣,,并有許多可供選擇。然而,,可能有必要篩選不同廠家的商品,,以確保:①細(xì)胞生長;②產(chǎn)物結(jié)構(gòu)可以持,;③不需要長的適應(yīng)期,;④到貨時(shí)間和價(jià)格可以接受。

當(dāng)從創(chuàng)建者或細(xì)胞庫獲得一個(gè)細(xì)胞系的時(shí)候,,他們會(huì)推薦合適的培養(yǎng)基,,除非培養(yǎng)基無貨或與其他成分不匹配才需更換培養(yǎng)基??赡艿脑?,最好還是用創(chuàng)建者推薦的培養(yǎng)基,因?yàn)樗赡苁谴_保該細(xì)胞系保持其特異性的唯(空格)一途徑,??蓞⒖急疚牡牟糠譄o血清培養(yǎng)基的適應(yīng)性。


2、細(xì)胞系對無血清培養(yǎng)基的適應(yīng)性

許多連續(xù)細(xì)胞系,,如HeLa,、CHO-K1或小鼠骨髓瘤可能可以適應(yīng)缺乏血清的生長環(huán)境。適應(yīng)過程常常是一個(gè)很長的選擇周期,,此間只有細(xì)胞群體中的少數(shù)被選擇出來,,因此在此選擇過程中確保細(xì)胞系的性質(zhì)不喪失是很重要的。如果是骨髓瘤細(xì)胞,,其目的是用于制備雜交瘤,;而如果是CHO細(xì)胞,則是用于轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn),,因此用無血清培養(yǎng)基的選擇培養(yǎng)必須在融合和轉(zhuǎn)染之前進(jìn)行,,使選擇過程中丟失特性的危險(xiǎn)性降到最(空格)低。

適應(yīng)無血清培養(yǎng)基通常要經(jīng)過幾次連續(xù)的傳代培養(yǎng),,在每次傳代時(shí)或傳代前,,或根據(jù)適應(yīng)的程度確定更換頻率,使血清濃度逐漸降低,。一旦細(xì)胞在某一血清濃度條件下形成穩(wěn)定的增殖狀態(tài),,就可用更低濃度的血清將細(xì)胞傳代培養(yǎng),直至穩(wěn)定的生長增殖再次形成,,而后再次稀釋血清,。

如果是懸浮培養(yǎng),要計(jì)算活細(xì)胞的數(shù)量,,根據(jù)活細(xì)胞的數(shù)量稀釋細(xì)胞懸液,,此時(shí)需要保持的最(空格)低細(xì)胞濃度要比正常傳代培養(yǎng)所需的細(xì)胞濃度高一些。對于單層細(xì)胞培養(yǎng),,可在傳代培養(yǎng)的前幾天先降低培養(yǎng)基中的血清濃度,,而后再用新的低濃度培養(yǎng)基進(jìn)行傳代培養(yǎng)。在適應(yīng)過程中,,可能我要在培養(yǎng)基中添加一些已知的因子來代替血清,。

對于那些在無血清培養(yǎng)基中生長的增殖細(xì)胞,加入血清有可能抑制其生長,。生長因子,, 如TGF-B能夠抑制上皮細(xì)胞的生長,EGF抑制A431細(xì)胞的生長,。

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