植入物被植入人體后,，會被蛋白質和細胞覆蓋。為了了解這些界面上的相互作用,，需要使用體外工具,。允許動態(tài)和靜態(tài)流動條件的實時無標簽平臺被用來了解細胞粘附，并以這種方式提高植入物的兼容性,。同樣的特點也有利于基于細胞檢測的生物傳感器的發(fā)展,。細胞也可以用作臨床生物傳感器(用于癌癥)研究中的分析物。

      采用多參數(shù)表面等離子體共振(MP-SPR)技術測定了人間充質干細胞(ADMSC)和溶菌酶蛋白在幾十微米厚的羥基磷灰石(HA)表面上的附著,。羥基磷灰石是存在于牙齒和骨骼中的一種成分,，其合成形式被廣泛用于骨科假體中，以增強種植體的骨整合,。MP-SPR測量結果表明,，細胞傾向于與HA涂層結合,，而不是金涂層。

       在另一項實驗中,，開發(fā)了一種生物傳感器來檢測腫瘤細胞,，測定乳腺癌細胞(MCF7)和非癌細胞(MCF-10A)與表面結合的靶向肽(18-4)和參比肽的結合情況。生物傳感器表面能夠區(qū)分癌細胞和正常細胞,。

簡介

       在藥物發(fā)現(xiàn)和生物傳感器開發(fā)領域,，通常需要確定生物分子相互作用。表面等離子體共振(SPR)是一種成熟的實時測量無標記分子相互作用的方法,。強大的多參數(shù)表面等離子體共振(MP-SPR)儀器可以進行寬角度范圍(40-78度)和多個波長的測量,，這將SPR的適用性擴展到組織工程和使用全細胞和納米顆粒的生物傳感。廣泛的測量范圍使得MP-SPR能夠測量比SPR場穿透深度厚得多的薄膜,，例如微米厚的聚合物,、陶瓷薄膜或活細胞。

圖一：A,、研究了干細胞(AD-MSC)在陶瓷羥基磷灰石表面的結合對骨科假體發(fā)育的影響,。

B、通過測定乳腺癌細胞MCF7與靶肽的結合,，開發(fā)用于血液腫瘤檢測的生物傳感器,。

實驗結果討論

       羥基磷灰石(HA)在基質上形成數(shù)十微米厚的多孔層。掃描電鏡(SEM)測得其厚度為24±6 μm（圖二）,。在金表面，細胞粘附在10分鐘內達到平臺值,。相比之下,，HA表面的結合明顯較慢，90分鐘后才達到平臺期（圖三）,。AD-MSC細胞在羥基磷灰石表面的附著明顯強于金表面,。多孔羥基磷灰石涂層的有效表面積大于金表面的有效表面積。

圖二：在空氣中測量有和沒有HA涂層的TiO₂傳感器滑動的全SPR曲線

圖三：與金相比,，AD-MSC細胞在羥基磷灰石(HA)上的粘附明顯更強

        這影響結合率和細胞的粘附量,，透明質酸有利于細胞附著，從而促進種植體骨整合,。溶菌酶蛋白與透明質酸涂層緊密結合(圖四),。然而，部分蛋白質在漂洗過程中與表面分離,，表明蛋白質和透明質酸涂層之間的相互作用相當弱,。

圖四：溶菌酶在羥基磷灰石涂層上的結合動力學

       癌細胞(MCF7)與靶肽的結合明顯強于與參比肽的結合(圖五)。兩種細胞類型均與參考肽表面結合,，表明細胞對底物的非特異性結合程度較低,。非癌細胞與目標肽的結合甚至低于與參考表面的結合,，從而表明對癌細胞具有理想的肽選擇性。肽表面對癌細胞的敏感性低至5±3個細胞/mL,。

圖五：癌細胞(MCF7)和非癌細胞(MCF10A)與靶肽和參比肽的結合,。

結論

       MP-SPR測量細胞在幾微米厚的涂層上以及在表面固定的靶分子上的粘附性。這種實時技術適用于測量各種材料的結合動力學,，從金屬(TiO2)和陶瓷(HA)到軟材料材料(PDMS),。MP-SPR測量在受控溫度(15至45°C)和靜態(tài)和動態(tài)流動條件下，從而使儀器強大并能為活細胞傳感,。