超微量紫外可見分光光度計是通過檢測物質(zhì)波長處或某一波長范疇內(nèi)光的吸收度,，對物質(zhì)進行定量與定量分析的儀器設(shè)備,，目前已成為現(xiàn)代分子生物學、藥物學,、食品科學等領(lǐng)域的常用儀器,。常用于核酸,，蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。  

1,、核酸的定量  

  核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率的功能,。可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸,，單鏈,、雙鏈DNA，以及RNA,。核酸的吸收峰的吸收波長260nm,。每種核酸的分子構(gòu)成不一，因此其換算系數(shù)不同,。定量不同類型的核酸,，事先要選擇對應(yīng)的系數(shù)。測試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算,，從而得出相應(yīng)的樣品濃度,。

2、核酸的純度檢測  

  除了核酸濃度,，超微量分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度,，如：  

（1）A260/A280的比值，用于評估樣品的純度,，因為蛋白的吸收峰是280nm,。純凈的樣品，比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA),。如果比值低于1.8或者2.0,，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。  

（2）A230表示樣品中存在一些污染物,，如碳水化合物,，多肽，苯酚等,，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0,。   

3、蛋白質(zhì)直接定量  

  這種方法是在280nm波長,，直接測試蛋白,。超微量分光光度計可以直接顯示出樣品的濃度，或者是選擇相應(yīng)的換算方法,，將吸光值轉(zhuǎn)換為樣品濃度,。由于緩沖液中存在一些雜質(zhì)，一般要消除320nm的"背景"信息,，設(shè)定此功能"開",。與測試核酸類似,，要求A280的吸光值大于0.1A，的線性范圍在1.0-1.5之間,。蛋白質(zhì)直接定量方法,，適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質(zhì),。紫外直接定量法相對于比色法來說,，速度快，操作簡單;但是容易受到平行物質(zhì)的干擾,，如DNA的干擾;另外敏感度低,，要求蛋白的濃度較高。  

4,、比色法蛋白質(zhì)定量（顏色反應(yīng)）  

  蛋白質(zhì)比色法測定的基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)構(gòu)成成分:氨基酸與外加的顯色基團或者染料反應(yīng),，產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應(yīng)的氨基酸數(shù)目直接相關(guān),，從而反應(yīng)蛋白質(zhì)濃度,。  

比色方法一般有BCA，Bradford,，Lowry等幾種方法,。  

由于各種方法反應(yīng)的基團以及顯色基團不一，所以同時使用幾種方法對同一樣品得出的樣品濃度無可比性,。所以在選擇比色法之前,，是參照要測試的樣本的化學構(gòu)成，尋找化學構(gòu)成類似的標準蛋白作標準品,。  

5,、OD600（菌落密度）  

  實驗室確定細菌生長密度和生長期，多根據(jù)經(jīng)驗和目測推斷細菌的生長密度,。在遇到要求較高的實驗,，需要采用分光光度計準確測定細菌細胞密度。通過檢測600nm處細胞生長培養(yǎng)的吸光度,，從而監(jiān)測微生物或其他細胞培養(yǎng)的生長率,。OD600是追蹤液體培養(yǎng)物中微生物生長的標準方法。實驗中偶爾會出現(xiàn)菌液的OD值出現(xiàn)負值,，原因是采用了顯色的培養(yǎng)基,，即細菌培養(yǎng)一段時間后，與培養(yǎng)基反應(yīng),，發(fā)生變色反應(yīng),。

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