100%水相分析有機(jī)酸,,瓦里安經(jīng)典Polaris有點(diǎn)強(qiáng)
有機(jī)酸是食品重要的組成成分之一,,它與食品加工,、貯存,、質(zhì)量評(píng)價(jià)等密切相關(guān),,因此受到人們的重視,。食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB5009.157-2016 特別規(guī)定了食品中酒石酸、乳酸,、蘋果酸,、檸檬酸、丁二酸,、富馬酸和己二酸的測(cè)定方法,。
極性強(qiáng),保留弱,,難測(cè)定
上述有機(jī)酸尤其是酒石酸和蘋果酸,,極性強(qiáng),在反相色譜柱上保留弱,。通常需要使用高比例水相流動(dòng)相才能獲得足夠的保留,,從而達(dá)到所需的分離度。而許多反相色譜柱在使用高比例水相流動(dòng)相時(shí)保留能力會(huì)隨時(shí)間急劇下降,。
這種在高含水量流動(dòng)相中分析物保留量的損失稱為“固定相塌陷”,。為防止固定相塌陷,,改性的極性反相色譜柱在極性化合物分析中得到了普遍應(yīng)用。
防止固定相塌陷,,100%水相分析
瓦里安經(jīng)典Polaris色譜柱提供了多種極性固定相填料,,能夠可靠地分離極性和非極性分析物的混合物,并獲得出色的峰形,。極性嵌入式C8和C18鍵合相與100%水相兼容,,能有效保留極性化合物,如極性有機(jī)酸,,且不易發(fā)生“固定相塌陷”,,從而獲得可靠的分析結(jié)果。
采用Polaris HPLC色譜柱分析食品中的有機(jī)酸
本應(yīng)用使用Agilent Polaris C18-A(4.6×250 mm,5μm)色譜柱,,按照國(guó)標(biāo)GB5009.157-2016方法對(duì)有機(jī)酸進(jìn)行了分析,。
實(shí)驗(yàn)部分
1、標(biāo)品及樣品溶液配制:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)要求配制標(biāo)準(zhǔn)品濃溶液,,并用0.1%磷酸溶液稀釋至適宜濃度,。實(shí)驗(yàn)用果汁樣品,準(zhǔn)確稱取5g(精確至0.01g)均勻試樣,,放入25mL容量瓶中,,加水至刻度,混合均勻,,取1mL經(jīng)0.45μm水相濾膜過濾,注入高效液相色譜儀分析,。
2,、儀器部分:Agilent 1260 Infinity II高效液相色譜系統(tǒng)。液相色譜條件見表1,。
表 1. 液相色譜條件

實(shí)驗(yàn)結(jié)果
在 Agilent Polaris C18-A 色譜柱上重現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)中的等度方法(流動(dòng)相為 97.5% 的 0.1% 磷酸水溶液 /2.5% 甲醇溶液),,并對(duì)規(guī)定的有機(jī)酸標(biāo)準(zhǔn)品及一種果汁飲料樣品進(jìn)行分析檢測(cè)。如圖 1 所示,,6 種有機(jī)酸均實(shí)現(xiàn)了充分保留和分離,,在樣品中成功檢測(cè)到了檸檬酸。

圖 1. 使用 Agilent Polaris C18-A 色譜柱 (4.6 × 250 mm, 5 μm) 分析標(biāo)準(zhǔn)品和樣品,,流動(dòng)相為 97.5% 的 0.1% H3PO4 水溶液 / 2.5% 甲醇溶液,。
Polaris C18-A 色譜柱具有極性嵌入式 C18 鍵合相,與 100% 水相兼容,,無固定相塌陷風(fēng)險(xiǎn),。在本應(yīng)用中,調(diào)整流動(dòng)相比例至 100% 的 0.1% 磷酸水溶液(100%水相),,并對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品及樣品進(jìn)行分析,。如圖 2 所示,,樣品中的有機(jī)酸能獲得更強(qiáng)的保留,使一些目標(biāo)分析物(例如蘋果酸和檸檬酸)和樣品中的干擾物實(shí)現(xiàn)了更好的分離,。在 100% 水性流動(dòng)相下進(jìn)行 10 次連續(xù)進(jìn)樣,,仍能獲得了良好的重現(xiàn)性,如圖 3 所示,。

圖 2. 使用 Agilent Polaris C18-A 色譜柱 (4.6 × 250 mm, 5 μm) 分析標(biāo)準(zhǔn)品和樣品,,流動(dòng)相為 100% 的 0.1% H3PO4 水溶液。

圖 3. 使用 AgilentPolaris C18-A 色譜柱 (4.6 × 250 mm, 5 μm) 分析標(biāo)準(zhǔn)品和樣品,,流動(dòng)相為 97.5% 的 0.1% H3PO4 水溶液/ 2.5% 甲醇溶液,。
總結(jié)
具有極性嵌入式 C18 鍵合相的 Agilent Polaris C18-A 色譜柱能夠很好地保留和分離有機(jī)酸等極性化合物,并且在 100% 水相流動(dòng)相條件下,,不會(huì)發(fā)生固定相塌陷,。可以對(duì)國(guó)標(biāo) GB5009.157-2016 中規(guī)定的有機(jī)酸進(jìn)行分離檢測(cè),。
耗材及色譜柱推薦
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色譜柱入口:Agilent InfinityLab Quick Connect LC fitting(部件號(hào):5067-5965)
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色譜柱出口:Agilent InfinityLab Quick Turn LC fitting(部件號(hào):5067?5966)
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Agilent 樣品瓶, screw top, amber, write?on spot, certified, 2 mL(部件號(hào):5182-0716)
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Agilent 樣品瓶蓋, bonded blue, PTFE/red silicone septa(部件號(hào):5190-702)
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Agilent ValueLab PTFE-Q 針頭過濾器,,13 mm 直徑,0.45 µm 孔徑(部件號(hào):5191-4295)
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Agilent Polaris C18-A, 4.6 × 250 mm, 5 μm(部件號(hào):A2000250X046)
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參考文獻(xiàn):
[1] 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB5009.157-2016《食品中有機(jī)酸的測(cè)定》。
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