細(xì)胞學(xué)堂 | 手把手教你培養(yǎng)SV-HUC-1

來源：武漢普諾賽生命科技有限公司 2023年11月14日 17:21

SV-HUC-1 (人輸尿管上皮永生化細(xì)胞),，是由猿猴空泡病毒40轉(zhuǎn)染至1名11歲男孩的泌尿道上皮細(xì)胞,，而建立起來的永生化細(xì)胞系。其分化特性與正常細(xì)胞相似,，培養(yǎng)簡單,，可無限傳代，卻不屬于腫瘤細(xì)胞^[1],。

基礎(chǔ)信息

生長培養(yǎng)基：

Ham's F-12K＋10% FBS＋1% P/S

生長特性：貼壁,，上皮細(xì)胞樣

推薦傳代比例：1:2-1:4

推薦換液頻率：2~3次/周

培養(yǎng)條件：

氣相：空氣，95%,；CO₂,，5%

溫度：37℃

凍存條件：

55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

SV-HUC-1細(xì)胞正常生長

細(xì)胞傳代

從培養(yǎng)容器中吸出用過的細(xì)胞培養(yǎng)基并丟棄；

用PBS沖洗細(xì)胞（每10cm²培養(yǎng)表面積約2mL 溶液）,。從與貼壁細(xì)胞層相對的容器一側(cè)輕輕加入沖洗液,，以避免攪動細(xì)胞層，前后輕柔搖晃容器數(shù)次,；

從培養(yǎng)容器中吸出沖洗液并丟棄,，向培養(yǎng)瓶中加入0.25%胰酶（試劑量應(yīng)足以覆蓋細(xì)胞層）；

輕輕搖晃容器,，使試劑*覆蓋細(xì)胞層,，T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶留 200μL左右即可；

將培養(yǎng)容器放在培養(yǎng)箱中孵育5分鐘左右,，在顯微鏡下觀察細(xì)胞解離情況,；

當(dāng)細(xì)胞解離程度≥ 90%時，傾斜培養(yǎng)容器,，使細(xì)胞上液體盡快流盡,，加入所用胰酶兩倍體積的*培養(yǎng)基，吹打細(xì)胞層表面數(shù)次,，使培養(yǎng)基分散,；

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到無菌離心管中，以 200×g 的離心力離心 3-5 分鐘；

用最少體積的*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,，將細(xì)胞懸液按照推薦比例稀釋,，并將適量體積的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的細(xì)胞培養(yǎng)容器中，再將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱,。

注意事項

1,、待細(xì)胞匯合度達(dá)到80%-90%時，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),；

2,、該細(xì)胞較難消化，注意延長消化時間,。待消化到細(xì)胞收縮變圓,，輕拍培養(yǎng)瓶側(cè)邊，細(xì)胞可以滑落方可終止消化,；

3,、如果使用培養(yǎng)瓶，在將其放入培養(yǎng)箱前,，應(yīng)將瓶蓋旋松,，以便進(jìn)行充分的氣體交換，除非您使用的是通氣式培養(yǎng)瓶和透氣性瓶蓋,。

●參考文獻(xiàn)●

[1] 王惠惠, 陳鋒, 朱佳玉, 席淑華, 孫貴范. 亞砷-酸鈉對SV-HUC-1細(xì)胞NRF2通路影響[J]. 中國公共衛(wèi)生, 2017, 33(1): 95-97.

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