• Sepiatec SFC-50 instrument

• Sepmatix 8x SFC instrument

• PrepPure Silica, 5μm, 250 x 10mm

• PrepPure Diol, 5μm, 250 x 10mm

• PrepPure Silica, 5μm, 250 x 4.6mm

• PrepPure Diol, 5μm, 250 x 4.6mm

• PrepPure Amino, 5μm, 250 x 4.6mm

• PrepPure 2-EP, 5μm, 250 x 4.6mm

• Reprosil 4-EP, 5μm, 250 x 4.6mm (Dr. Maisch GmbH)

• PrepPure PEI, 5μm, 250 x 4.6mm

• PrepPure CBD, 5μm, 250 x 4.6mm

• Cyano, 5μm, 250 x 4.6mm, (Dr. Maisch GmbH)

• 二氧化碳(99.9%)

• 甲醇(≥99%)

• 尿嘧啶(99% + %)

• 可可素(99%)

• 咖啡(99%以上)

• 茶堿(99%)

樣品制備：

在 50/2.5mL 甲醇/水混合液中,，40℃ 下用超聲水浴溶解 0.05g 尿嘧啶,，0.07g 咖啡因，0.055g 可可堿,，0.085g 茶堿,。

Sepmatix 8x SFC 篩選運(yùn)行條件：

流動相：A =二氧化碳：甲醇

流速：3ml /min(每柱)

流動相條件：

0-0.5min：5% B

0.5-8.0min：5 - 50%

8.0-9.4min：50%

9.4-9.5min：50 - 5%

9.5-10min：5% B

檢測：紫外掃描波段：200nm - 600nm

篩選運(yùn)行是自動開始的。使用流量控制單元將流量設(shè)置為每通道 3mL/min,，并平衡色譜柱,。自動進(jìn)樣(V=5 μL)，開始平行篩選(運(yùn)行時間=10min),。背壓調(diào)節(jié)器設(shè)置為 150bar,，柱箱加熱至 32°C。

SFC-50 運(yùn)行條件：

流動相：A =二氧化碳,；B=甲醇

流動相條件：等度運(yùn)行條件

檢測：紫外波長 270nm

SFC 柱在規(guī)定的流速下條件預(yù)熱 3 分鐘,，使用定量環(huán)自動注入樣品并開始運(yùn)行。背壓調(diào)節(jié)器設(shè)置為 150bar,，柱箱加熱至 40°C,。

用 Sepmatix 8x SFC 篩選色譜柱：

為了確定樣品的最佳分離選擇性，進(jìn)行了不同色譜柱的篩選,。使用 Sepmatix 8x SFC 儀器可以高效地同時篩選8個色譜柱,。因此，最佳選擇性可以在很短的時間內(nèi)確定,。為此,，使用了 8 種不同的固定相:硅膠、二醇基,、氨基,、氰基,、2-EP、4-EP,、PEI 和 CBD,，圖1顯示了篩選的結(jié)果。

在本文中，使用 Sepmatix 8x SFC 進(jìn)行柱篩選,，并將開發(fā)結(jié)果轉(zhuǎn)移到 Sepiatec SFC-50 進(jìn)行放大。在色譜參數(shù)分辨率和運(yùn)行時間方面,，二醇基表現(xiàn)出最好的效果,。對于二醇基，根據(jù)篩選結(jié)果,，在 Sepiatec SFC-50 儀器上采用 250 × 10 mm 柱進(jìn)行等度堆疊進(jìn)樣,。作為比較，開發(fā)了另一種用于硅膠填料的方法,，但分辨率值略差,。

這種分離表明，要想在 prep-SFC 中獲得一個好的分離方法，事先通過柱篩選確定最佳選擇性是很重要的,。然后,，該方法可以在 prep-SFC 上簡單實(shí)現(xiàn)，并進(jìn)行了優(yōu)化,。最理想的是,，該方法在等度條件下應(yīng)用，以最大限度地提高產(chǎn)量,。

每次注射后的疊加紫外信號表明該方法具有良好的再現(xiàn)性(圖3和4,，下面)。垂直線描述了收集相應(yīng)分?jǐn)?shù)的時間窗口,。

1. https://doi.org/10.1093/chromsci/46.2.144

2. DOI: 10.1021/jf030817m

3. DOI: 10.1016/j.foodchem.2004.11.013

4. DOI: 10.1016/j.saa.2004.03.030

5. Laboratory Chromatography Gμide, ISBN 3-033-00339-7, by Büchi Labortechnik AG (Switzerland)