概念——Mckay于1997年在《Science》雜志上將神經(jīng)干細胞（neural stem cells,，NSCs）的概念總結為：具有分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞及少突膠質(zhì)細胞的能力,，能自我更新并足以提供大量腦組織細胞的細胞,，神經(jīng)干細胞的發(fā)現(xiàn)打破了神經(jīng)細胞不能再生的傳統(tǒng)理論。

圖1 第3,、5,、7代神經(jīng)球巢蛋白免疫熒光染色(×400)免疫熒光染色陽性圖片

特點——通過對稱分裂和不對稱分裂兩種分裂方式完成自我更新，NSCs具有多向分化潛能,，且不表達成熟抗原,，不被免疫系統(tǒng)所識別，能通過血腦屏障,，可以與宿主的神經(jīng)組織良好融合,，在宿主體內(nèi)長期存活。

應用——神經(jīng)干細胞能夠趨向損傷部位，通過分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子或者分化為不同的細胞修復或補充受損神經(jīng)組織,，神經(jīng)干細胞還可以作為基因載體,，用于顱內(nèi)腫瘤和其它神經(jīng)疾病的基因治療，此外,，體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細胞可用于判斷藥效及藥物毒性,，例如觀察某些化合物的神經(jīng)活性。目前美國臨床信息公示數(shù)據(jù)庫中,，NSCs相關的臨床實驗共有122例,，涉及到了多發(fā)性硬化、帕金森病,、膠質(zhì)母細胞瘤,、脊髓損傷等。

不對稱分裂：一種細胞分裂的方式,，母細胞產(chǎn)生的兩個子細胞的類型各不相同,。相反，對稱性分裂就是產(chǎn)生兩個相同的細胞,。

神經(jīng)干細胞培養(yǎng)——許多研究表明采用無血清培養(yǎng)基,，NSCs 可以穩(wěn)定在未分化狀態(tài)，而采用含血清培養(yǎng)基,，NSCs 多數(shù)分化為神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞,。

B-27添加劑（50×，不含維生素A）abs9272是無血清添加劑,，包含抗氧化劑,、神經(jīng)細胞所需生長因子、維生素（不含維生素A）和神經(jīng)元所需的脂肪酸等,，以適宜比例配比,，可應用于大多數(shù)神經(jīng)細胞培養(yǎng)。無維生素 A型可防止干細胞向神經(jīng)細胞分化,，是神經(jīng)干細胞無血清培養(yǎng)不能少的試劑,。推薦搭配神經(jīng)元基礎培養(yǎng)基(abs9460)進行培養(yǎng)。 由于L-谷氨酰胺在水溶液中不穩(wěn)定,，神經(jīng)元基礎培養(yǎng)基和B-27中都未包含L-谷氨酰胺,，因此在配制培養(yǎng)基時須另外添加L-谷氨酰胺。

圖2 不同類型培養(yǎng)基(×100)形成4d神經(jīng)球的比較

A:無血清培養(yǎng)基含有B27(2%)原代培養(yǎng)4d,；B:含血清培養(yǎng)基原代培養(yǎng)4d

培養(yǎng)基配置方案

1,、置于4°C解凍本產(chǎn)品；
2,、在使用前無菌添加2％本產(chǎn)品和5mM L-谷氨酰胺至神經(jīng)元基礎培養(yǎng)基,，配制成神經(jīng)元培養(yǎng)基注意：剩余的本產(chǎn)品可以等分成工作體積,，并儲存在-20℃。避免反復凍融,；
3,、對于原代海馬神經(jīng)元培養(yǎng)，神經(jīng)元培養(yǎng)基（由前述步驟制備）需要額外補充25μM的L-谷氨酸,，在培養(yǎng)4天以后不再額外添加谷氨酸,。配置好的培養(yǎng)基，可于2-8℃的避光可保存一周,。

圖3 B-27添加劑（50×,，不含維生素A） abs9272

細胞培養(yǎng)步驟

1,、用預冷的0.05mg/mL多聚賴氨酸水溶液包被培養(yǎng)皿表,，每平方厘米表面使用0.15mL，室溫包被1h,；
2,、去除多聚賴氨酸溶液，并用無菌蒸餾水沖洗（多聚賴氨酸對細胞有毒性）,。在超凈工作臺中打開培養(yǎng)皿的蓋子通風,，直到干燥。培養(yǎng)皿干燥后可以立即使用或在4°C最多保存2周,；
3,、根據(jù)標準實驗室程序或隨細胞提供的說明書分離原代的大鼠神經(jīng)元或解凍凍存的原代大鼠神經(jīng)元；
4,、在預熱的（37℃）神經(jīng)元培養(yǎng)基中（如前所述的方法制備) 接種細胞,，建議的細胞密度為160個細胞/平方毫米, 或必要時使用自行優(yōu)化的細胞密度；
5,、在37℃,，含5%二氧化碳的潮濕環(huán)境中培養(yǎng)；
6,、培養(yǎng)4-24h后, 更換一半體積的新鮮培養(yǎng)基,，繼續(xù)在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
7,、對海馬神經(jīng)元以外的細胞：在接種4d后,，更換一半體積的新鮮的培養(yǎng)基，之后每3d重復一次,。 

對海馬神經(jīng)元：接種3d后,，用不含L-谷氨酸的新鮮培養(yǎng)基更換一半體積的培養(yǎng)基。之后每3d重復一次,。 

注意：在培養(yǎng)基中添加25µM 2-Mercaptoethanol,，可改善海馬神經(jīng)元的長期存活率。 

其他神經(jīng)細胞培養(yǎng)添加物

除B27（50×，不含維生素A）外,，含維生素的B27(abs9120),、N-2無血清添加劑(100×)(abs9121)，以及馬血清在神經(jīng)細胞培養(yǎng)中的應用都較為廣泛,。

區(qū)別在于：N-2無血清添加劑是化學成分確定的添加劑,，N-2 添加劑主要被推薦用于神經(jīng)母細胞瘤以及周圍神經(jīng)系統(tǒng)(PNS)與中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)來源的有絲分裂后期的神經(jīng)元的生長和表達。B-27添加劑(50×)用于海馬神經(jīng)元和其他中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)神經(jīng)元的生長和保持其短期或長期活性,。其中不含維生素A款,，可防止干細胞向神經(jīng)細胞分化，更適合神經(jīng)干細胞體外增殖,。很早之前就有研究人員對比過不同種類血清對神經(jīng)細胞培養(yǎng)的影響,，結果發(fā)現(xiàn)相對于胎牛和其他動物血清，馬血清(abs989)促進神經(jīng)細胞的增殖的作用顯著,，與胎牛血清相比,，馬血清用于培養(yǎng)神經(jīng)細胞，具有非常高的性價比,。

胞胞巴適本期推薦：

[1] 吳增,李媛,靳曉飛等.神經(jīng)干細胞提取與培養(yǎng)方法的比較研究[J].中國藥理學通報,2018,34(05):729-734.

[2] 于麗華,趙書平,席先成等.不同種類血清對新生大鼠大腦皮層神經(jīng)細胞培養(yǎng)的影響[J].實用醫(yī)藥雜志,2002(03):190-192.

注：文中圖片來自網(wǎng)絡或參考文獻,，僅供學習參考用

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