貨號：AZ00003

儲運條件

-20℃

產品組成

產品簡介

All-in-One RT SuperMix for qPCR(with dsDNase) 是一款便捷,、減少污染的高質量一鏈cDNA 合成試劑盒，包含M-MLV GIIIReverse Transcriptase 及其反應Buffer,、RNA 酶抑制劑,、dNTPs,Oligo(dT)20VN 和隨機引物等一鏈cDNA 合成所需的所有組分，僅需加入RNA 模板和水即可開始反應,。All-in-One RT SuperMix for qPCR(withdsDNase) 作為升后的一鏈cDNA 合成試劑盒,，15 分鐘內長可獲得12 kb cDNA,，產物可用于qPCR,、普通PCR 等實驗。從組織或細胞中提取的RNA 往往殘留基因組DNA 污染,，如果反轉錄不做去除處理,，下游進行qPCR 反應時基因組DNA 與cDNA會同時進行擴增，尤其是引物設計在同一外顯子上時,，影響定量準確性,。本試劑盒所采用的dsDNase 能夠特異性消化雙鏈DNA 或DNARNA雜合雙鏈中的DNA，并且具有熱敏感性,，在逆轉錄反應溫度下即可快速不可逆地失活,。與傳統(tǒng)使DNase I 去除基因組DNA 污染的方法相比，dsDNase 無需額外加入EDTA 進行失活,，不僅節(jié)省實驗時間,，而且降低了對逆轉錄反應的抑制?？梢罁?jù)基因組DNA 污染嚴重程度,，選擇去基因組DNA 污染與反轉錄分開進行，或者去基因組DNA 污染與反轉錄一步進行的操作方法,。

使用方法

針對基因組DNA 含量低的RNA 樣品（推薦方案）

① 于冰上配制如下反應體系：

a. 推薦使用試劑盒提取的高質量RNA 作為模板,。

② 輕柔吸打混勻，瞬離；

③ 37℃溫育2 min,，以去除基因組DNA 污染,；

④ 55℃溫育15 min；

⑤ 反應結束后,，85℃溫育2 min 以終止反應,；

⑥ 迅速將獲得的cDNA 置于冰上，用于后續(xù)實驗,；或立即保存于-20℃,。

針對基因組DNA 含量高RNA 樣品

1. 基因組DNA 污染去除

① 于冰上配制如下反應體系：

a. 推薦采用試劑盒提取的RNA 作為模板。

② 輕柔吸打混勻,，瞬離,；

③ 37℃溫育2 min，以去除基因組DNA 污染,；

注：若RNA 中基因組DNA 污染嚴重,，可適當延長37℃溫育時間至5 min。

④ 65℃溫育2 min,，使dsDNase 失活,，然后置于冰上。

2. diyi鏈cDNA 合成

① 于冰上配制如下反應體系：

② 輕柔吸打混勻,，瞬離,；

③ 50℃溫育15 min；

注：若目標RNA 不含Poly(A) 結構,，可預先25℃溫育10 min,。

④ 反應結束后，85℃溫育2 min,，以終止反應,；

⑤ 將獲得的cDNA 溶液置于冰上，用于后續(xù)實驗,。

注：cDNA 溶液置于-20℃儲存,，建議不超過1 周；置于-80℃可儲存,。

注意事項

預混液中已經包含Oligo(dT)20VN 和隨機引物,，不僅適用于包含Poly(A) 結構的真核生物mRNA，也適用于不含Poly(A) 結構的原核生物RNA,、真核生物rRNA 和tRNA 等模板,，但不適用于miRNA 等小RNA 模板。

美國Azaood公司成立于2004年,，是一家開發(fā)和生產用于生命科學研究,、診斷和生物技術應用的高質量純化酶、蛋白質、核酸和細胞分離試劑盒,、胎牛血清的行業(yè)導者,；Azood公司是通過了ISO9001認證的主要制造商，可以滿足從研究到大規(guī)模批量生物加工和OEM應用與要求的公司,。