關(guān)于細(xì)胞轉(zhuǎn)染，有許多常用的轉(zhuǎn)染試劑,。下面簡(jiǎn)單介紹下Lipo3000轉(zhuǎn)染細(xì)胞的步驟及注意事項(xiàng),。

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：Lipofectamine™ 3000轉(zhuǎn)染試劑、Opti-MEM（可以用無(wú)血清的培養(yǎng)基代替）

實(shí)驗(yàn)步驟：

1.接種細(xì)胞,，使其在轉(zhuǎn)染時(shí)達(dá)到70–90%匯合度,。

注：對(duì)于HEK293，6孔板一般鋪50萬(wàn)個(gè)細(xì)胞左右,。對(duì)于PC9, 24孔板一般鋪5-10萬(wàn)個(gè)細(xì)胞,。由于不同細(xì)胞，生長(zhǎng)狀況不太一樣,，需要根據(jù)情況調(diào)整,。

2.使用Opti-MEM™培養(yǎng)基稀釋Lipofectamine™ 3000試劑，充分混勻,。

3.使用Opti-MEM™培養(yǎng)基稀釋DNA,，制備DNA預(yù)混液，然后添加P3000™試劑,，充分混勻,。

4.將上面兩步溶液合在一起，混勻并孵育10-15mins,。

5.將混勻后的溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中,，并輕輕搖晃培養(yǎng)基，使其均勻,。

6.37°C孵育細(xì)胞2–4天,，然后分析轉(zhuǎn)染細(xì)胞。

注意事項(xiàng)：

1.Opti-MEM需要37℃水浴鍋預(yù)熱,。

2.轉(zhuǎn)染siRNA至細(xì)胞時(shí),，在稀釋siRNA時(shí)不要加入P3000™試劑。

3.關(guān)于Lipo3000的用量,，比如6孔板推薦用量有兩個(gè)3.75ul和7.5ul,，最di看轉(zhuǎn)染效率，zui高看細(xì)胞耐受,。

4. Opti-MEM與Lipo3000預(yù)混及Opti-MEM,、質(zhì)粒及P3000預(yù)混，都不需要各自孵育,，而且兩者混合后孵育時(shí)間最多不要超過(guò)15mins,。

5.轉(zhuǎn)染中和轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞培養(yǎng)基中最好不要含有雙抗。

對(duì)于比較好轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,，如HEK293,，而且需要大量轉(zhuǎn)染的時(shí)候,，可以使用PEI進(jìn)行轉(zhuǎn)染，畢竟Lipo3000比較貴,。例如,，在做CO-IP實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要10cm皿轉(zhuǎn)染好幾種質(zhì)粒,，就可以用PEI進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染,。