聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase Chain Reaction)簡(jiǎn)稱PCR，是一種體外高效擴(kuò)增特定DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù),。該技術(shù)的發(fā)明人是Kary Mullis,，他從1983年開(kāi)始研究PCR技術(shù)，1985年開(kāi)始被逐漸采用,，成為分子生物學(xué)的一項(xiàng)常規(guī)手段,，并得到了廣泛的應(yīng)用，在臨床診斷,、生物醫(yī)學(xué)研究和法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域都具有重要意義,。PCR是在體外模擬體內(nèi)DNA復(fù)制的過(guò)程，它用加熱的辦法讓需要擴(kuò)增的DNA片段變性解鏈成兩條單鏈，人工合成的一對(duì)引物讓它們結(jié)合到DNA模板（分別結(jié)合到兩條鏈上）的兩端,，DNA聚合酶即可以大量復(fù)制該模板,。了解了PCR的基本過(guò)程，再一起來(lái)學(xué)習(xí)一下PCR體系及各類常見(jiàn)PCR辨析吧,！

PCR體系

1. 模板

需要研究或擴(kuò)增的目的核酸分子,，DNA可以直接擴(kuò)增，RNA需要增加一步逆轉(zhuǎn)錄,，或者在體系中加逆轉(zhuǎn)錄酶一步法進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增；

2. 引物

良好設(shè)計(jì)的引物,，是擴(kuò)增特異性及擴(kuò)增效率的關(guān)鍵因素之一,；

3. Taqase

PCR體系的核心組分，Taqase的性能,，直接決定了擴(kuò)增體系能否達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求,；

針對(duì)不同類型的模板、特異性的要求,、產(chǎn)物保真度的要求,、擴(kuò)增產(chǎn)物的長(zhǎng)度，需要選用能滿足對(duì)應(yīng)要求的Taqase,；所選用的酶如果不匹配,，實(shí)驗(yàn)是無(wú)法成功的；

對(duì)一株Taqase的性能評(píng)價(jià),，主要是如下幾個(gè)方面：擴(kuò)增效率,，擴(kuò)增速度，保真度,，除了催化鏈延伸之外的其它活性,，抗逆性等；

4. dNTP

dNTP的濃度和質(zhì)量,，也是影響擴(kuò)增產(chǎn)率的一個(gè)重要因素,；dNTP分子中，含有一個(gè)高能磷酸鍵,，是影響dNTP穩(wěn)定性的關(guān)鍵因素,，高能磷酸鍵的斷裂也是造成dNTP質(zhì)量不合格的分子層面的原因；

5. Buffer

為PCR反應(yīng)體系提供穩(wěn)定的工作環(huán)境,，主要環(huán)境因素為pH值,，離子強(qiáng)度等；

6. Mg++

因?yàn)殒V離子對(duì)Taqase活性影響大,，所以一般buffer之外,，還單獨(dú)帶一管Mg++，方便用戶靈活調(diào)節(jié)體系里面Mg++濃度；

除了上述六種必要的組分之外,，還有較多的工具蛋白或者小分子化合物,，能對(duì)PCR體系起到相應(yīng)的作用，這方面累積的研究成果也比較多,。

各類常見(jiàn)PCR辨析

1. PCR,，通常指的是普通PCR，以雙鏈DNA為模板,，以dNTP為底物,，大量（30個(gè)循環(huán)理論上可以使產(chǎn)物增加到模板初始摩爾數(shù)的10的9次方倍）擴(kuò)增雙鏈DNA。產(chǎn)物通常以電泳及凝膠成像方式來(lái)分析,。

2. qPCR和Real-time PCR,，指的是實(shí)時(shí)熒光定量PCR，以DNA或cDNA為模板,，以dNTP為底物,，以熒光基團(tuán)為報(bào)告分子，收集熒光信號(hào)從而對(duì)擴(kuò)增出的DNA進(jìn)行定量分析,。為避免和RT-PCR（逆轉(zhuǎn)錄PCR）混淆,，現(xiàn)在一般不太常用real-time PCR，通常交流,，用qPCR指代更明確,。

3. RT-PCR，指的是逆轉(zhuǎn)錄PCR,，以由mRNA逆轉(zhuǎn)錄成的cDNA為模板,，以dNTP為底物，進(jìn)行DNA的擴(kuò)增及檢測(cè),。

4. RT-qPCR,，指的是實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR，是qPCR+RT-PCR的組合,，將總RNA或mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后再作為模板,，以dNTP為底物，進(jìn)行產(chǎn)物的定量分析,。