本試劑盒僅供科研使用 
 β-半乳糖苷酶（β-Galactosidase, β-GAL）試劑盒說明書 （貨號：WS4250F 分光法 24 樣） 
一、產品簡介： β-半乳糖苷酶（β-GAL,，EC 3.2.1.23)又稱β-D-半乳糖苷半乳糖基轉移酶,，簡稱乳糖酶， 專一性作用于β-D-半乳糖苷類化合物的酶,，廣泛用于生化分析,、醫(yī)學和食品等領域。 本試劑盒提供一種簡單，靈敏,，快速的測定方法,，β-GAL 分解對-硝基苯-β-D-吡喃半 乳糖苷生成對-硝基苯酚，后者在 405nm 有最大吸收峰,，通過測定吸光值升高速率來計 算β-GAL 活性,。 二、測試盒組成和配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 30mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 粉劑 mg×1 支 4℃保存 臨用前加 2ml 水,。 試劑二 液體 8mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 液 20mL×1 瓶 4℃保存 標準品 粉劑×1 支 4℃保存 若重新做標曲,，則用到該試劑。 
三,、所需的儀器和用品： 可見分光光度計,、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、臺式離心機,、水浴鍋,、可調式移液器、 研缽,、冰,。 
四、β-半乳糖苷酶（β-GAL）活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,，了解本批樣品情況,，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費,！ 1,、樣本制備： ① 組織樣本：稱取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.5g），加入 1mL 提取液,，冰浴 勻漿,，然后 12000rpm，4℃,，離心 10min,，取上清作為粗體液，置于冰上待測,。 
【注】：若增加樣本量,，可按照組織質量(g)：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取 ② 細菌或細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清,；取約 500 萬細菌或細 胞,，加入 1mL 提取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴,，功率 20％或 200W,，超聲 3s,， 間隔 10s，重復 30 次）,；15000 rpm 4℃離心 10min,，取上清，置冰上待測,。 
【注】：若增加樣本量,，可按照細菌或細胞數(shù)量(104個)：提取液體積（mL)為 500~1000:1 比例進行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測,。若渾濁,，離心后取上清檢測。 2,、上機檢測： ①可見分光光度計預熱 30min 以上,，溫度設定 37℃，波長設定為 405nm,，蒸餾水調零,。 ②在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 樣本 20 20 試劑一 75 蒸餾水 75 試劑二 115 115 迅速混勻，37℃保溫 30min 試劑三 540 540 混勻,，全部液體轉移到 1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）本試劑盒僅供科研使用 2 中,， 405nm 處測定吸光值 A，ΔA=A 測定-A 對照（每 個測定管需設一個對照管）,。 【注】：若ΔA 過小,，可增加樣本上樣量 V1（如增至 60μL，則試劑三相應減少）,，或延長保 溫時間（如：40min 或更長）,，則改變后的 V1 或 T 需重新代入計算公式計算。 
五,、結果計算： 1,、標準曲線方程：y = 0.022x + 0.0045：x 是標準品 PNP 的質量（nmol），y 是ΔA,。 2,、按樣本蛋白濃度計算： 單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘產生 1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。 β-GAL 活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0045)÷0.022]÷(V1×Cpr)÷T=75.76×(ΔA-0.0045)÷Cpr 3,、按樣本鮮重計算： 單位定義：每克組織每分鐘產生 1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位,。 β-GAL 活性(nmol/min/g 鮮重)=[(ΔA-0.0045)÷0.022]÷(W×V1÷V)÷T=75.76×(ΔA-0.0045) ÷W 4、按細菌或細胞密度計算： 單位定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘產生 1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位,。 β-GAL 活性(nmol/min/104cell)=[(ΔA-0.0045)÷0.022]÷(500×V1÷V)÷T=0.152×(ΔA-0.0045) 5、按液體體積： 單位定義：每毫升液體每分鐘產生 1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位,。 β-GAL 活性(nmol/min/mL)=[(ΔA-0.0045)÷0.022]÷V1÷T=75.76×(ΔA-0.0045) V---加入提取液體積,，1mL； V1---加入反應體系中樣本體積，0.02mL,； W---樣本質量,，g； T---反應時間,，30min,； PNP 對分子質量---139.11； 500---細胞或細菌數(shù)量,，萬,； Cpr---樣本蛋白質濃度，mg/mL,，建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測試劑盒,。 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（1mg/mL）：向標準品 EP 管里面加入 1ml 蒸餾水。 2 把母液用蒸餾水稀釋成以下濃度梯度的標準品：0, 0.1, 0.15, 0.2, 0.25, 0.3mg/mL,。也 可根據(jù)實際樣本來調整標準品濃度,。 3 在 EP 管加入：20μL 標準品+75μL 蒸餾水+115μL 試劑二+540μL 試劑三，混勻,，全 部液體轉移到 1mL 玻璃比色皿中,，于 405nm 下讀取吸光值。 4 根據(jù)結果制作標準曲線,。