酶標(biāo)板的選購及拆裝酶標(biāo)板有哪些注意事項

　　BUNSEN教您如何選購酶標(biāo)板有哪些注意事項：

　　在酶聯(lián)免疫吸附試驗中, 參與免疫學(xué)反應(yīng)的抗原,、抗體、標(biāo)記抗體或抗原的純度,、濃度和比例;緩沖液種類,、濃度和離子強度,、pH值和反應(yīng)溫度,、時間等條件起著關(guān)鍵作用。此外,作為載體的固相聚苯乙烯表面對抗原,、抗體或抗原抗體復(fù)合物的吸附也起著重要作用,。

　　BUNSEN酶標(biāo)板一般要比細(xì)胞培養(yǎng)板貴，細(xì)胞板主要做細(xì)胞培養(yǎng),，也可以用來測蛋白濃度;酶標(biāo)板包括包被板和反應(yīng)板,，一般不用做細(xì)胞培養(yǎng)，它主要做免疫酶聯(lián)反應(yīng)后的蛋白檢測,，需要更高的要求和特定的酶標(biāo)工作液,。

　　一：根據(jù)酶標(biāo)板底部的不同，可以分為平底,、U型底,、V型底

　　平底的折射率低，適于在酶標(biāo)儀檢測;U型底的酶標(biāo)板折射率較高,，方便加樣,、吸樣、混勻等操作,，可以不用放在酶標(biāo)儀上,，直接通過目測觀察顏色變化情況，從而判定有無相應(yīng)的免疫反應(yīng),。V底的酶標(biāo)板可以精確的吸取樣品,。

　　二：根據(jù)酶標(biāo)板與蛋白和其它分子結(jié)合能力的不同，分為高結(jié)合力,、中結(jié)合力和氨基化

　　高結(jié)合力：表面經(jīng)處理后,，其蛋白結(jié)合能力大大增強，可達(dá)300~400ngIgG/cm2,，主要結(jié)合的蛋白分子量>10kD,。使用該類酶標(biāo)板可提高敏感性，并可相對減少包被蛋白的濃度和用量,，不足之處為較易產(chǎn)生非特異性反應(yīng),。抗原或抗體包被后,，以非離子去污劑無法有效地封閉未結(jié)合蛋白的部位,，需使用蛋白作為封閉劑。

　　中結(jié)合力：經(jīng)表面疏水鍵被動與蛋白結(jié)合,，適合作為分子量>20kD的大分子蛋白的固相載體,，其蛋白結(jié)合能力為200~300ng IgG/cm2。由于該類酶標(biāo)板所具有的僅與大分子結(jié)合的特性,，適用于作為未純化抗體或抗原的固相載體,，可降低潛在的非特異性交叉反應(yīng),。該類板可以惰性蛋白或非離子去污劑作為封閉液。

　　氨基化：經(jīng)表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基,，其疏水鍵由親水鍵取代,。該類酶標(biāo)板適合作為小分子蛋白的固相載體。使用合適的緩沖液和pH值,，其表面可通過離子鍵與帶負(fù)電荷的小分子結(jié)合,。由于其表面的親水特性和可通過其它交聯(lián)劑共價結(jié)合的能力，可用于固定溶于Triton-100,、Tween 20等去污劑的蛋白分子,。該類板的缺陷為由于降低了疏水性，一部分蛋白分子無法結(jié)合;此外,，其表面需有效地封閉。由于親水和共價的表面特性,，使用的封閉液必須能夠與非反應(yīng)性氨基基團和所選擇的交聯(lián)劑中任何功能基團發(fā)生作用,。

　　三：根據(jù)顏色分為透明、黑色,、白色

　　透明的是常用的,，用于最一般的酶聯(lián)免疫實驗。相對于透明的的板子,，還有用于發(fā)光檢測用的不透明的板子,，一般有黑色和白色兩種。黑色的酶標(biāo)板自身會有光吸收,，所以它的信號相對于白色的板子要低很多,，因此一般用于檢測較強的光，如熒光檢測,。而白色的酶標(biāo)板就用于較弱的光檢測,，常用于一般的化學(xué)發(fā)光。另外黑色的酶標(biāo)板還可以消弱非特異反應(yīng)帶來的問題,。有些客戶會問,，用一般的酶標(biāo)板可不可以進行發(fā)光檢測，回答是不可以的,，因為一般從化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中發(fā)射出的光是各向同性的,，也就是說各個方向上同等發(fā)射出來的。如果用透明的板子,，光不僅會從垂直方向發(fā)散,，還從水平方向發(fā)散出來。很容易的就會通過各個孔之間的間隙和孔壁,。這樣的話,，光較強時相鄰孔之間的影響就會很大,，因此不能用透明的酶標(biāo)板來進行化學(xué)發(fā)光實驗。

　　拆裝酶標(biāo)板的注意事項：

　　酶標(biāo)板在酶聯(lián)免疫吸附試驗中, 參與免疫學(xué)反應(yīng)的抗原,、抗體,、標(biāo)記抗體或抗原的純度、濃度和比例;緩沖液種類,、濃度和離子強度,、pH值和反應(yīng)溫度、時間等條件起著關(guān)鍵作用,。

　　抗原,、抗體和其它生物分子通過多種機制吸附至載體表面，這包括通過疏水鍵,、流水/離子鍵的被動吸附,通過引入其它活性基團如氨基和碳基的共價結(jié)合,，以及通過表面改性后的親水鍵結(jié)合。

　　BUNSEN酶標(biāo)板的使用注意事項:

　　拍板動作

　　當(dāng)需要拍干板內(nèi)的液體時,，建議垂直向下拍打,，保證板內(nèi)殘留液體甩干程度的一致性。

　　嚴(yán)禁斜角拍干,，斜角拍打的過程中會導(dǎo)致上下板條受力不均,，易出現(xiàn)板條脫落的情況，且也會導(dǎo)致液體甩干程度不一致而影響實驗結(jié)果分析,。

　　拆裝動作

　　當(dāng)需要將板條拆下時,，可從板條正面兩端輕輕向上掰動，然后摳取下來,，務(wù)必要戴好無塵手套,，以免污染板條而影響板條的透光性。

　　不可從板條的一端強行掰取,，容易造成板條斷裂,。

　　在裝板條時，要注意方向,，板條兩端分別設(shè)計成方形和半圓形,，半圓形那端必須裝在有凸起臺階的卡槽內(nèi)(箭頭所在處)，切勿裝反,。

　　將板條裝入板框后,，在兩側(cè)和中間部位都需要進行按壓，壓實后方可進行后續(xù)實驗,。

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