抗體定量是可重復(fù)標記和可靠鑒定各種單克隆抗體類別的重要步驟,。它提供了可操作的信息,，包括特定應(yīng)用的最佳稀釋度,、如何有效純化特定抗體以及哪些細胞系將產(chǎn)生最有價值的結(jié)果,。

評估總抗體濃度可能具有挑戰(zhàn)性，因為根據(jù)用于純化樣品的技術(shù),，只有總計數(shù)的一部分包含活性抗原結(jié)合抗體,。此外，分子科學(xué)家可以使用各種實驗方法來進行抗體定量,。那么哪種技術(shù)最好呢,？

抗體終點滴定

滴定用于測量未知溶質(zhì)的濃度。抗體濃度由終點指示,，通常是溶液中跟隨或等于等當(dāng)點的顏色變化,。盡管該技術(shù)有其優(yōu)點，但抗體滴度可能會產(chǎn)生誤導(dǎo),，特別是對于含有高濃度非活性或低親和力抗體的樣品,。

酶聯(lián)免疫吸附測定 (ELISA)

ELISA 試劑盒在很大程度上取代了濕化學(xué)實驗室中的終點滴定，因為它們提供了更高的重現(xiàn)性和總抗體濃度的準確測量,。它們的工作原理是抗體-抗原結(jié)合,，允許使用與報告酶綴合的抗體對特定分析物進行準確定量，報告酶在添加到底物時會進行催化。同樣,，反應(yīng)通常由顏色變化來指示,。

傳統(tǒng)的 ELISA 試劑盒通常被認為是臨床診斷應(yīng)用的金標準，但這種免疫吸附測定有多種形式,，包括直接,、夾心和競爭 ELISA 試劑盒。

然而,，結(jié)果的精度通?；趩吸c插值，單點插值依賴于落在標準曲線內(nèi)的樣品稀釋度光密度,。

通過分光光度法進行抗體定量

分光光度法可以根據(jù) 280 nm 處的吸光度快速準確地進行抗體定量,。通過 280 nm 處的分光光度吸光度進行抗體定量是一種簡單且經(jīng)濟有效的方法。它提供了輸入特定消光系數(shù)的機會,，無需標準曲線或檢測試劑即可獲得準確的測量結(jié)果,，并可以評估熒光標記抗體的染料摻入情況。此外,，用戶還可以使用 Bradford 或 Lowry 等比色測定法進行分光光度抗體定量,。