微生物污染是一直是細(xì)胞培養(yǎng)的一個(gè)主要問(wèn)題，大到諸如細(xì)胞間,、層流室這種實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)布局,，小到每一次試劑外包裝的消毒,，都是在為了細(xì)胞免受外源微生物的侵害,。應(yīng)各位老師們的要求,，今天這篇文章主要講解細(xì)胞房的除菌方案,，順便討論一下常見(jiàn)的無(wú)菌操作漏洞,。

當(dāng)您和同門的細(xì)胞頻繁出現(xiàn)污染,，更換試劑之后仍然不能改善,，細(xì)胞丟棄一波又一波，建議為細(xì)胞間來(lái)場(chǎng)消毒吧。無(wú)論是紫外線照射（物理方法）還是甲醛加高錳酸鉀熏蒸,，都是為了盡可能的殺滅空氣中的微生物,。

圖1 細(xì)胞室

一、紫外線照射法

紫外線按照波長(zhǎng)劃分為四個(gè)波段：長(zhǎng)波UVA,、中波UVB,、短波UVC、真空波UVD,。波長(zhǎng)越長(zhǎng),，穿透能力越強(qiáng)，其中UVC（波長(zhǎng)200～280nm）被用來(lái)做紫外線殺菌燈,，可作用于DNA使一條DNA鏈上相鄰的兩個(gè)胸腺嘧啶共價(jià)結(jié)合而形成雙聚體改變了DNA的分子結(jié)構(gòu),，干擾DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄導(dǎo)致細(xì)菌死亡或變異，缺點(diǎn)也是顯而易見(jiàn)的,，UVC穿透力差,，無(wú)法穿透大部分的透明玻璃及塑料，同時(shí)短時(shí)間照射即可灼傷皮膚,，長(zhǎng)期或高強(qiáng)度照射還會(huì)造成皮膚癌。

圖2

這里提示在購(gòu)買紫外線消毒燈的時(shí)候登錄全國(guó)消毒產(chǎn)品網(wǎng)上備案信息服務(wù)平臺(tái)查詢備案,，可以看到生產(chǎn)許可證,，檢測(cè)報(bào)告等信息。

具體可參照：約13m²的房間30w紫外燈（距地面約2.5m）照射1h,，照射前抹凈燈管灰塵,，建議一周一次。照射時(shí)人員禁止入內(nèi),。

圖3 消毒產(chǎn)品網(wǎng)上備案信息

二,、甲醛加高錳酸鉀熏蒸法

甲醛無(wú)易燃易爆危險(xiǎn)易于獲得故在消毒與滅菌方面使用較為普遍。醛類主要通過(guò)凝固蛋白質(zhì)還原氨基酸使蛋白質(zhì)分子烷基化而殺滅細(xì)菌和其他微生物,，KMnO4是一個(gè)強(qiáng)氧化劑,，它會(huì)使得菌體酶蛋白失去活性，代謝機(jī)能障礙而死亡,。這種方法的缺點(diǎn)是醛蒸氣刺激性較大對(duì)人體有害,，是致癌物質(zhì)，并且對(duì)呼吸道的刺激較大,。具體可參照：每立方米加甲醛80ml：高錳酸鉀40g（2:1的比例）,，一定要先將高錳酸鉀倒入敞口容器，再加入40%的甲醛,！密閉熏蒸24h左右,，充分通風(fēng)（至少24h）在確保細(xì)胞房?jī)?nèi)沒(méi)有甲醛的刺激性氣味后實(shí)驗(yàn)人員才能進(jìn)入。

安全提示：動(dòng)作要迅速,，兩者反應(yīng)較強(qiáng)烈,，做好防護(hù),，注意不要濺到！甲醛遇到KMnO4會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)烈的氧化反應(yīng),，濺出來(lái)是很危險(xiǎn)的,，所以一定要使用敞口容器！??！

兩者相比，甲醛熏蒸法效果更好,，特別對(duì)于一些較難消除的真菌,，但是由于甲醛的致癌性，不建議頻繁使用,，可以結(jié)合紫外線照射法交替進(jìn)行,。

三、細(xì)胞房除菌劑

在進(jìn)行紫外線照射或者甲醛熏蒸之前,，需要對(duì)細(xì)胞間各個(gè)角落進(jìn)行擦拭,，愛(ài)必信細(xì)胞房清除劑，用于細(xì)菌,、真菌清除,，具有很強(qiáng)的抑菌功能，可用于細(xì)胞房的污染控制,，通過(guò)清除細(xì)胞房?jī)?nèi)細(xì)菌,、真菌及其孢子，可有效防止細(xì)胞的污染,。

圖4 細(xì)胞房除菌劑

使用方法：

1）直接對(duì)細(xì)胞房的死角,、墻面、空間進(jìn)行噴灑,，也可倒出少許,，將脫脂棉球浸泡后擦拭使用。 建議一周處理一次,，配合紫外線使用效果更佳,。
2）建議每立方米(m^3)使用量為5~8mL，如10m^2,、高3m的房間推薦用量為150mL,。遇污染爆發(fā)時(shí)期，如梅雨季節(jié)等,，可適當(dāng)增加用量,。若室內(nèi)墻壁上有霉菌生長(zhǎng)，可噴灑于墻壁表面，或者用浸泡后的棉球擦拭,。

溫馨提示：

1）操作時(shí),，穿戴適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)服和手套操作；
2）處理后,，人盡量遠(yuǎn)離細(xì)胞培養(yǎng)室,，待密封20~30 min 通風(fēng) 10min 后再使用；
3）避免直接接觸皮膚,、眼睛,，一旦接觸，應(yīng)立即用大量的清水沖洗,，不要延誤,。

圖5 實(shí)驗(yàn)室清潔劑

[1] 劉水平,羅志勇.細(xì)胞培養(yǎng)室空氣消毒效果的檢測(cè)[J].生物醫(yī)學(xué)工程研究,2006(01):53-54.

今天的講解就到這里啦，感興趣的老師們可以公眾號(hào)“愛(ài)必信生物”后臺(tái)留言哦,。

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