細胞凍存和復蘇是在細胞研究和生物醫(yī)學領域中常見的實驗技術,，用于長期保存和重復使用細胞。此步驟是細胞培養(yǎng)中的關鍵環(huán)節(jié),，直接影響細胞存活率和活力,，關系到后續(xù)細胞實驗能否按照計劃有效地進行。要想做好細胞凍存和復蘇,，首先請牢記下面這四個字：慢凍快融,！慢凍快融！慢凍快融,！重要的事情說三遍,！

那么細胞實驗中為什么要“慢凍快融”呢？

凍存細胞時,，細胞內(nèi)外環(huán)境中的水會形成冰晶,。如果直接將細胞凍存到 -196℃ 的液氮中，由于凍結過程中胞外溶液中的水先結冰,，使胞外溶液不斷濃縮,，引起細胞電解質(zhì)升高、滲透壓改變,、脫水及蛋白質(zhì)變性等,，會導致細胞受到機械性損傷,。

在冷凍保存時，細胞外環(huán)境中的水會結冰,。冷卻速度的不同會導致細胞由于滲透脫水而發(fā)生不同程度的收縮,。細胞外環(huán)境的滲透壓隨著水結成冰晶而不斷升高，冷卻速度越慢,，細胞內(nèi)水分通過滲透作用移出細胞的時間就越長,。因此，非常緩慢的冷卻可能會導致細胞因過度脫水而死亡 (A),。而快速冷卻 (C) 會導致細胞內(nèi)形成冰晶,，這會導致細胞在復溫時死亡。中間冷卻速度 (B) 則可以平衡滲透脫水和細胞內(nèi)結冰形成的風險,，通?？梢詫崿F(xiàn)細胞存活率的大幅提升。

如果在凍存液中加入保護劑 (如 sigma 二甲基亞砜,，DMSO),，可使冰點降低，增加細胞滲透壓穩(wěn)定性,。減緩慢速降溫過程中的脫水皺縮現(xiàn)象,，在緩慢凍結時減少冰晶的生成，使細胞免受損傷[1],。

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