綿羊產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體(CPA-Ab)酶聯(lián)免疫分析

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用,。

檢測范圍：                                                         96T

3ng/L - 180ng/L

使用目的：

本試劑盒用于測定綿羊血清血漿及相關(guān)液體樣本中綿羊產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體(CPA-Ab)含量,。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標本中綿羊產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體(CPA-Ab)水平,。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原,，往包被的微孔中依次加入綿羊產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體(CPA-Ab)，再與HRP標記的抗原結(jié)合,，形成抗原-抗體-酶標抗原復(fù)合物,，經(jīng)過徹洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的綿羊產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體(CPA-Ab)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中綿羊產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體(CPA-Ab)濃度,。

試劑盒組成

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。  

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。

7. 溫育：操作同3,。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。

操作程序總結(jié)：

計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線,，最好做復(fù)孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

6．底物請避光保存,。

7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

9．本試劑不同批號組分不得混用,。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃,。

2．有效期：6個月