前言

膽固醇是動(dòng)物源性食品中常見的成分,，而人類過多食用膽固醇則會(huì)引發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化,、高血壓、冠心病等一系列心血管疾病以及風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎,、癌癥,、糖尿病和帕金森等疾病。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,，食用植物油中一般不含或含有極少量的膽固醇,，而動(dòng)植物組織中通常都含有甾醇，動(dòng)物油脂的特征性甾醇是膽固醇,。因此,，可以通過檢測(cè)食用植物油中的膽固醇含量來判定植物油中是否含有動(dòng)物油脂，從而推斷植物油中是否混有地溝油。

目前常用的膽固醇樣品提取凈化方法主要是皂化法,。而采用凝膠滲透色譜（GPC）進(jìn)行樣品前處理的報(bào)道還很罕見。本實(shí)驗(yàn)采用LabTech AutoClean全自動(dòng)凝膠凈化系統(tǒng)對(duì)植物油提取液進(jìn)行凈化,，根據(jù)分子排阻色譜原理可有效去除植物油中大分子基體干擾物質(zhì),，氮吹濃縮后，采用HPLC進(jìn)行檢測(cè),，方法簡(jiǎn)單,、快捷，能夠很好地去除干擾物對(duì)目標(biāo)物的影響,。

1,、實(shí)驗(yàn)過程

1.1 儀器與試劑

AutoClean全自動(dòng)凝膠凈化系統(tǒng)，北京萊伯泰科儀器股份有限公司,；

S-X3不銹鋼凝膠凈化柱（20*300mm）,，貨號(hào)：Y020207015，北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司,；

LC600二元高壓梯度高效液相色譜系統(tǒng),，北京萊伯泰科儀器股份有限公司；

E.T.氮吹濃縮儀,，貨號(hào)：C020017,，北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司；

甲醇（色譜純）,，購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司,；

乙酸乙酯（色譜純），購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司,；

環(huán)己烷（色譜純）,，購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司。

1.2 工作液配制

膽固醇標(biāo)準(zhǔn)使用溶液：10mg/mL,，溶劑為乙醇,，購(gòu)自壇墨質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心；

膽固醇標(biāo)準(zhǔn)工作液：取1.0mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10mL的容量瓶中,，用乙醇定容,，得到濃度為1.0mg/mL的標(biāo)樣工作液；

分別移取1.0mg/mL的膽固醇標(biāo)準(zhǔn)工作液0.01,、0.02,、0.05、0.1,、0.2mL各置于1.0mL容量瓶中,，用乙醇定容至刻度，得到濃度為10,、20,、50,、100、200μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線,。

1.3 實(shí)驗(yàn)部分

1.3.1 樣品制備

稱取0.5g食用油于50mL離心管中,，加入10mL乙酸乙酯-環(huán)己烷（1:1）混合溶液，旋渦震蕩后,，將溶液轉(zhuǎn)移至AutoClean全自動(dòng)凝膠凈化系統(tǒng)的進(jìn)樣瓶中,。

1.3.2 凝膠凈化處理

將1.3.1中裝有提取液的進(jìn)樣瓶放置在AutoClean全自動(dòng)凝膠凈化系統(tǒng)的平臺(tái)上，以等體積的乙酸乙酯和環(huán)己烷混合溶液為流動(dòng)相,，流速：5mL/min,；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)254nm；收集8～16min餾分于60mL收集瓶中,，開始凝膠凈化,，凈化后將60mL收集瓶移至ET濃縮儀中，40℃氮吹至近干,，加入1mL乙醇充分溶解,，待檢測(cè)。

1.3.3 LC分析測(cè)定條件

色譜柱：C18,，柱長(zhǎng)250mm,，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5μm,；

流動(dòng)相：甲醇,；

流速：1.0mL/min；

紫外檢測(cè)器：檢測(cè)波長(zhǎng)205nm,；

柱溫：40℃,；

進(jìn)樣量：20μL。

2,、       實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖1 膽固醇標(biāo)準(zhǔn)混合溶液的色譜圖

圖2 大豆油加標(biāo)色譜圖

圖3 玉米胚芽油加標(biāo)色譜圖

3,、       結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)使用S-X3不銹鋼凝膠凈化柱（20*300mm）（北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司，貨號(hào)：Y020207015）對(duì)植物油中膽固醇提取液進(jìn)行凈化,，回收率在88.8%~97.9%之間,，RSD為1.5%~3.6%，回收率高,、重現(xiàn)性良好,，說明S-X3不銹鋼凝膠凈化柱（20*300mm）適用于植物油中膽固醇測(cè)定的樣品凈化處理，并且結(jié)果穩(wěn)定,、可靠,。

4、       參考文獻(xiàn)

[1] GB 5009.128-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中膽固醇的測(cè)定 高效液相色譜法

[2] DB34/T 1765-2012 動(dòng)物油脂中膽固醇含量的測(cè)定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法